论文摘要
目的研究表明,细胞内不仅存在着mRNA分子,还存在着大量的非编码RNA分子,它们不编码蛋白质,但参与基因表达的调控。近年来发现的miRNA（microRNA）就是其中一种有重要功能的非编码RNA分子,miRNA广泛的参与机体生长、发育和疾病发生等各种生命过程。虽然在各种生物中已发现了数百条miRNA基因,但对它们的功能我们还知之甚少,为了深入研究miRNA在人类细胞中的作用,我们构建了人源miRNA表达载体的miRNA分子表达库。方法依据Sanger miRBase数据库收录的miRNA序列设计引物,从HepG2细胞基因组上扩增含有miRNA前体的目的片段,克隆进真核表达载体,采用Northern blot及双荧光素酶分析技术进行表达及功能验证。结果共构建了包括207条人源miRNA表达载体的miRNA分子表达库,随机挑选pmiR-16,pmiR-24,pmiR-125a进行表达验证,发现它们都可以在HEK293细胞中表达成熟的miRNA分子,同时通过双荧光素酶分析技术检测发现pmiR-16,pmiR-483可以在HepG2细胞中表达,并能抑制含有相应靶位点的报告基因的表达。结论本研究构建了一个大型的miRNA分子表达库,实验结果表明该miRNA表达库可以表达功能miRNA,并可用于miRNA功能的筛选和研究。
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