论文摘要
目的:本课题主要研究Tamoxifen（TAM）联合60Coγ线对脑胶质瘤细胞的抑制作用以及TAM对细胞辐射敏感性的影响;TAM和60Coγ线对胶质瘤细胞的凋亡诱导作用和细胞周期进程的影响;TAM对SHG-44细胞内游离钙离子水平的影响;探求TAM对脑胶质瘤细胞SHG-44抑制作用和增强细胞辐射敏感性的机制。 方法:利用3H-TdR掺入法研究TAM单用以及和60Coγ线联用对脑胶质瘤细胞SHG-44 DNA合成抑制作用,以及SHG-44细胞对60Coγ线的辐射敏感性。 用流式细胞仪检测TAM和60Coγ线诱导的SHG-44细胞凋亡和细胞周期分布改变;用AO/EB染色法,在激光共聚焦显微镜下观察SHG-44细胞凋亡的形态学特征;利用免疫组化的方法,以雌激素受体阳性的乳腺癌标本作阳性对照,研究了脑胶质瘤细胞SHG-44雌激素受体的表达情况。 应用Hochst染色,在激光共聚焦显微镜下观察TAM对钙离子载体A23187诱导细胞凋亡的变化。用钙离子荧光探针Fluo-3/AM:负载培养的SHG-44细胞,在激光共聚焦显微镜下测定细胞内游离Ca2+水平。 结果:TAM在体外能明显抑制SHG-44细胞DNA合成,且抑制作用呈浓度依赖性,和60Coγ线联用具有显著的协同抑制作用。TAM使SHG-44细胞的剂量-效应曲线发生改变,且向左移,D0值下降。 TAM能使SHG-44细胞周期发生改变,表现为G0/G1期和G2/M期细胞所占比例增加,而S期细胞所占比例减少;TAM明显诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性,凋亡细胞核固缩和核碎裂,可见凋亡小体形成。免疫组化结果显示乳腺癌细胞核呈深棕色,而SHG-44细胞核无染色,即SHG-44细胞不表达雌激素受体,说明TAM抑制细胞DNA合成和增加细胞的辐射敏感性主要不是通过药物本身抗雌激素作用介导的,而可能是通过它将细胞阻滞于G0/G1和G2/M期和诱导细胞凋亡途径实现的。 TAM能加速钙离子载体A23187诱导细胞凋亡。在细胞外有Ca2+情况下,TAM呈剂
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