化妆品用抑制人体蠕形螨的中草药筛选、作用机理研究及功效检测

论文摘要

人体蠕形螨是一类永久性寄生螨，在健康人群的皮肤内寄生，人群中的感染率为0.8%～91.8%，主要寄生于人体颜面部皮脂腺发达的部位，严重影响人们的健康和美容，因此受到广泛关注。根据蠕形螨感致病途径，总结出三个层面的抑螨途径：1）通过抑制皮脂腺多余油脂分泌，防止形成螨虫繁殖的有利环境；2）抑制皮肤表面菌和提高机体T淋巴细胞免疫应答能力，增强皮肤自身的保护力，避免在机体免疫力下降时，螨虫与皮肤菌合并感染，造成皮肤蠕形螨病变；3）通过生物手段阻止蠕形螨的生长代谢，导致螨虫死亡。针对以上抑螨途径，本文对通过查阅文献得到的20种具有抑螨功效的中草药提取物进行了化妆品用抑制人体蠕形螨中草药筛选、作用机理研究及功效检测的初步研究，实验结果如下：1．通过观察20种中草药提取物的颜色、气味、澄清度等感官指标和测定可溶性固形物、pH值等理化指标对其进行常态稳定性检测，发现常温下3种中草药提取物发生变色、沉淀等不稳定现象；2.通过RBC溶血实验、透明质酸酶体外抑制实验和改良RBC溶血实验对17种中草药提取物进行了刺激性、抗敏功效和抗刺激性的安全性检测，发现2种中草药提取液刺激性达到15%以上，并伴随发生轻微溶血现象。3．建立了体外抑螨实验的替代实验—抑制几丁质酶活性实验，并且证明了该方法与体外抑螨实验具有显著相关性。通过抑制几丁质酶活性（包括透明圈定性和化学反应定量实验）检测15种中草药提取物的抑螨功效，抑制率较高的3种为大黄88.9%、仙鹤草77.5%、艾叶70.2%；通过牛津杯抑菌圈法对15种中草药提取物的抑菌（金黄葡萄球菌、表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌和糠枇马拉色菌）活性进行检测。结果显示，对4种菌均有抑菌效果的为大黄、黄柏、苦参。综合抑螨、抑菌两方面功效筛选，确定大黄提取物为综合效果最佳的原料。4．对大黄提取物中蒽醌类物质的抑螨活性作用机理进行了初步研究。在已有的HPLC色谱条件基础上对大黄提取物中5种蒽醌类物质含量进行检测，结果显示芦荟大黄素0.4mg/g、大黄酸1.2mg/g、大黄素0.1mg/g、大黄酚0.8mg/g、大黄素甲醚0.4mg/g。对5种蒽醌类活性物质进行抑制几丁质酶活性检测，抑制率最佳的为芦荟大黄素92.53%，其余四种抑制率均低于85%；对5种蒽醌类活性物质进行了抑菌活性检测，5种物质对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌有抑菌活性。实验表明，大黄提取物中含有此5种蒽醌类物质，并且对抑螨抑菌起主要作用。5．从抑制油脂分泌、促进T淋巴细胞增殖和体外抑螨三方面对大黄提取物的抑螨途径进行初步研究。结果显示，大黄提取物对油性肌肤和混合型肌肤均有抑制油脂分泌的作用，当大黄提取物浓度为2.5%时，抑制率为31.1%；大黄提取物对T淋巴细胞的增值没有促进作用，反而浓度超过5%时有抑制作用；大黄提取物的浓度与抑螨率呈正相关性，50%大黄提取物作用2h后抑制率可达84%。实验说明，大黄提取物对防螨、抑螨有一定功效，对增强皮肤自身保护力没有作用。综上所诉，本论文建立的抑制几丁质酶活性实验与传统的体外抑螨实验相比，是一种快捷简便的体外抑螨功效检测方法；通过稳定性、安全性、功效性检测筛选出的大黄提取物，可作为综合抑螨的化妆品原料；对大黄提取物中的蒽醌类物质抑螨活性的初步探讨，为下一步抑螨机理的深入研究提供了较好的理论指导价值；通过对大黄提取物抑螨途径的研究，为今后开发抑螨化妆品拓展了新思路。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 绪论
• 1.1 人体蠕形螨生物学特性
• 1.2 人体蠕形螨致病
• 1.2.1 人体蠕形螨致病机制
• 1.2.2 人体蠕形螨与皮肤病
• 1.3 感染人群分布
• 1.4 抑螨化妆品市场现状
• 1.5 抑螨添加剂市场现状
• 1.6 抑螨化妆品功效检测方法
• 1.7 立题的背景、意义及技术路线
• 1.7.1 立题背景
• 1.7.2 立题意义
• 1.7.3 技术路线
• 第二章 抑制人体蠕形螨活性物质初步稳定性检测
• 2.1 引言
• 2.2 材料、试剂与设备
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 主要试剂
• 2.2.3 主要设备
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 中草药提取液的制备
• 2.3.2 中草药提取液稳定性检测
• 2.4 结果与讨论
• 2.5 本章小结
• 第三章 抑制人体蠕形螨活性物质的安全性检测
• 3.1 引言
• 3.2 材料、试剂与设备
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 主要试剂
• 3.2.3 主要设备
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 RBC 溶血实验测定中草药提取液刺激性
• 3.3.2 透明质酸酶体外抑制法测定抗敏功效
• 3.3.3 改良 RBC 溶血实验测定抗刺激效功效
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 17 种中草药提取液刺激性的测定结果
• 3.4.2 17 种中草药提取液抗敏功效的测定结果
• 3.4.3 17 种中草药提取液抗刺激功效的测定结果
• 3.5 本章小结
• 第四章 抑制人体蠕形螨活性物质功效性检测
• 4.1 引言
• 4.2 材料、试剂与设备
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 主要试剂
• 4.2.3 主要设备
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 替代实验的相关性验证
• 4.3.2 几丁质酶抑制活性的检测
• 4.3.3 对 4 种皮肤菌的抑制作用检测
• 4.4 结果与分析
• 4.4.1 替代实验相关性分析结果
• 4.4.2 透明圈法测定中草药抑制几丁质酶活性实验结果
• 4.4.3 化学法测定中草药抑制几丁质酶活性实验结果
• 4.4.4 牛津杯法测定中草药抑制皮肤菌的实验结果
• 4.5 本章小结
• 第五章 大黄粗提物中抑螨活性物质作用机理初步研究
• 5.1 引言
• 5.2 材料、试剂与设备
• 5.2.1 实验材料
• 5.2.2 主要试剂
• 5.2.3 主要设备
• 5.3 实验方法
• 5.3.1 大黄中蒽醌类物质的 HPLC 分析方法的建立
• 5.3.2 大黄水提液中蒽醌类物质含量的测定
• 5.3.3 五种蒽醌类物质对照品的抑制几丁质酶活性检测
• 5.3.4 五种蒽醌类物质对照品的抑菌活性检测
• 5.4 结果与讨论
• 5.4.1 大黄中蒽醌类物质的 HPLC 分析方法的建立
• 5.4.2 大黄水提液中蒽醌类物质的含量检测
• 5.4.3 蒽醌类物质对照品的几丁质酶活性检测
• 5.4.4 蒽醌类物质对照品的抑菌活性检测
• 5.5 本章小结
• 第六章 大黄粗提物抑螨途径的作用机理研究
• 6.1 引言
• 6.2 材料、试剂与设备
• 6.2.1 实验材料
• 6.2.2 主要试剂
• 6.2.3 主要设备
• 6.3 实验方法
• 6.3.1 皮脂分泌的抑制功效评价
• 6.3.2 T 淋巴细胞增殖-Alamer 蓝淋转化实验
• 6.3.3 体外抑螨试验
• 6.4 结果与讨论
• 6.4.1 皮脂分泌的抑制功效评价
• 6.4.2 T 淋巴细胞增殖实验,
• 6.4.3 体外抑螨试验
• 6.5 本章小节
• 第七章 结论与展望
• 7.1 主要结论
• 7.2 展望
• 参考文献
• 在学期间发表的学术论文及研究成果
• 致谢