论文摘要
溶菌酶（lysozyme,LYSO）是一种存在于生物体内的小分子碱性蛋白质,能够和许多外源和内源性物质结合,运载多种药物。黄酮类化合物广泛分布于植物界中,具有抗菌消炎、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性,是重要的天然产物之一。研究黄酮类药物小分子与LYSO的相互作用,在分子水平上探讨药物的作用机理,寻找发挥药效的活性基团以及药代动力学方面均具有重要意义。B族维生素是人体每天必须补充的营养物质之一,研究其对药物与蛋白质相互结合的影响,可以从实际角度了解日常摄入的营养素对药物代谢的作用。目的:研究黄酮类化合物与LYSO相互作用的光谱特征,讨论其荧光猝灭机制、结合常数、结合位点数、结合距离、热力学参数、LYSO构象变化等信息,并考察B族维生素的加入对黄酮类化合物与LYSO相互作用的影响。方法:在模拟人体生理pH条件下,采用荧光光谱法和紫外-可见光谱法研究不同温度下（298 K、304 K和310 K）黄酮化合物（木犀草素、木犀草苷、金合欢素、金合欢苷、黄芩素、黄芩苷）和黄酮醇化合物（槲皮素、槲皮苷、芦丁、金丝桃苷）分别与LYSO相互作用的光谱特征;讨论其荧光猝灭机制;求算结合常数、结合位点数和结合距离;根据热力学方程判断作用力类型;利用同步荧光光谱法和三维荧光光谱法考察黄酮类化合物对LYSO构象的影响;同时分别测定310 K时,维生素B1（VB1）、维生素B2（VB2）、维生素B3（VB3）、维生素B5（VB5）和维生素B6（VB6）的存在对黄酮类化合物与LYSO结合反应的影响,计算结合常数和结合位点数。结果:木犀草素、木犀草苷、金合欢素、金合欢苷、黄芩素、黄芩苷、槲皮素、槲皮苷、芦丁、金丝桃苷均能与LYSO发生结合反应,使LYSO的内源性荧光产生猝灭,猝灭常数随温度的升高而降低。结合常数的数量级为103106,结合位点数都接近于1。十种黄酮类化合物与LYSO的结合距离分别为4.32、3.83、4.14、4.07、4.22、3.51、4.56、4.07、4.02、4.28nm,均小于7 nm。根据热力学方程,木犀草素、木犀草苷、金合欢素、金合欢苷、槲皮素、槲皮苷、芦丁、金丝桃苷与LYSO之间ΔH<0,ΔS<0;黄芩素和黄芩苷与LYSO之间ΔH<0,ΔS>0。同步荧光和三维荧光光谱表明黄酮类化合物的加入均会使LYSO的吸收峰强度和位移发生改变。在VB1、VB2、VB3、VB5或VB6的存在下,黄酮类化合物与LYSO的结合常数和结合位点数均增大,结合常数的数量级达到105108,结合位点数仍在1左右。另外,B族维生素的存在也影响了LYSO荧光峰红移或蓝移的程度。结论:在模拟人体生理pH条件下,木犀草素、木犀草苷、金合欢素、金合欢苷、黄芩素、黄芩苷、槲皮素、槲皮苷、芦丁和金丝桃苷对LYSO的内源性荧光均能产生静态猝灭。供能体（LYSO）和受能体（黄酮类化合物）之间发生了非辐射能量转移。黄酮类化合物与LYSO结合生成新的复合物,木犀草素、木犀草苷、金合欢素、金合欢苷、槲皮素、槲皮苷、芦丁、金丝桃苷与LYSO之间以氢键和范德华力结合为主,黄芩素、黄芩苷与LYSO之间以静电引力结合为主。同步荧光光谱和三维荧光光谱表明,黄酮类化合物与LYSO的相互作用影响了LYSO色氨酸残基所处的微环境,导致了LYSO构象的变化。考察B族维生素的影响发现,VB1、VB2、VB3、VB5或VB6的加入使黄酮类化合物与LYSO的结合常数和结合位点数均增大,更有利于结合反应的进行。
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