本文主要研究内容
作者郑贝贝（2019）在《小分子化合物Vc和RG108组合对山羊iPSC-like细胞多能性维持的研究》一文中研究指出：本研究利用山羊诱导多能干细胞(giPSCs-like)为实验材料,筛选能够促进giPSCs多能性状态维持的小分子化合物,从而优化培养体系。再对优化后的培养体系下获得的giPSCs进行一系列生物学特性检测,同时结合RNA-seq技术和生物信息学分析,探究其促进多能性维持的相关分子机制。1.促进山羊iPSC-like细胞多能性的培养条件筛选(1)通过比对添加单个作用于表观遗传的小分子药物对giPSC-like细胞的影响,以克隆形态,碱性磷酸酶活性以及相关基因的表达量作为鉴定指标,结果发现:Vc组与RG108组可以明显促进克隆的生长速度与维持克隆形态,克隆更加透亮,碱性磷酸酶(AP)活性增强。同时添加Vc组显著提高了组蛋白去甲基化酶KDM2B和DNA去甲基化酶TET1,TET3的表达。添加RG108组降低了 DNA甲基转移酶抑制剂(DNMT1)的表达。(2)进一步筛选小分子组合,结果发现:Vc与RG108(即VR)组合使用时,AP活性更强,同时显著上调TET1,TET3和显著下调DNMT1的表达。另外多能性基因OCT4,SOX2,NANOG的表达量也显著提高,促进多能性的维持。(3)筛选基础培养基发现:DMEM/F12+10%FBS+10%KSR(DFK)的基础培养基明显提高克隆的生长速度和质量,QRT-PCR结果显示该基础培养基结合VR培养细胞时,OCT4,KLF4,NANOG,TET1表达量上调最显著。最终在此基础上完善培养基,发现添加碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),进一步促进克隆增殖速度和显著上调相关基因表达量,从而确定“DFK-VR+bFGF”(DMEM/F12+10%FBS+10%KSR+DOX+β-巯基乙醇+L-谷氨酰胺+ NEAA+Vc+RG108+bFGF)为优化后的培养体系。(4)“DFK-VR+bFGF”培养体系下获得的giPSCs进行生物学鉴定和无DOX条件培养。结果显示:giPSCs克隆圆润透亮,形态聚拢,呈现山羊正常的染色体核型,共60条染色体。与对照组相比,克隆生长速度快,AP活性强。相对荧光强度结果显示:H3K9me3的荧光强度显著降低,多能性基因SOX2和NANOG的荧光强度显著提高。无DOX培养条件下,“DFK-VR+bFGF”培养体系中能够在一定程度上维持克隆形态。2.山羊iPSC-like细胞在“DFK-VR+bFGF”以及对照组(GIPS)培养体系下转录组测序分析比较根据测序结果,分析“DFK-VR+bFGF”与GIPS两个体系下差异基因显著富集的KEGG通路,找到造成两组多能性差异的关键信号通路,包括有 Wnt signaling pathway,Hippo signaling pathway,PI3K-AKT signaling pathway等。发现激活Wnt信号通路有利于多能性的提升,激活PI3K-AKT信号通路会促进细胞增殖、抑制凋亡和促进糖原生成过程。Hippo信号通路对于有助于giPSCs的增殖、存活和多能性的维持至关重要。综上,我们筛选获得可促进giPSCs多能状态维持的培养体系“DFK-VR+bFGF”,推测该体系可能是通过小分子化合物Vc和RG108降低细胞整体甲基化,从而促进多能性的提升,同时激活了Wnt信号通路,Hippo信号通路和PI3K-AKT信号通路发挥重要作用。上述结果为山羊多能干细胞培养条件的进一步优化提供一定的理论基础,也为促进转基因动物生产以及畜牧业发展奠定基础。
Abstract
ben yan jiu li yong shan yang you dao duo neng gan xi bao (giPSCs-like)wei shi yan cai liao ,shai shua neng gou cu jin giPSCsduo neng xing zhuang tai wei chi de xiao fen zi hua ge wu ,cong er you hua pei yang ti ji 。zai dui you hua hou de pei yang ti ji xia huo de de giPSCsjin hang yi ji lie sheng wu xue te xing jian ce ,tong shi jie ge RNA-seqji shu he sheng wu xin xi xue fen xi ,tan jiu ji cu jin duo neng xing wei chi de xiang guan fen zi ji zhi 。1.cu jin shan yang iPSC-likexi bao duo neng xing de pei yang tiao jian shai shua (1)tong guo bi dui tian jia chan ge zuo yong yu biao guan wei chuan de xiao fen zi yao wu dui giPSC-likexi bao de ying xiang ,yi ke long xing tai ,jian xing lin suan mei huo xing yi ji xiang guan ji yin de biao da liang zuo wei jian ding zhi biao ,jie guo fa xian :Vczu yu RG108zu ke yi ming xian cu jin ke long de sheng chang su du yu wei chi ke long xing tai ,ke long geng jia tou liang ,jian xing lin suan mei (AP)huo xing zeng jiang 。tong shi tian jia Vczu xian zhe di gao le zu dan bai qu jia ji hua mei KDM2Bhe DNAqu jia ji hua mei TET1,TET3de biao da 。tian jia RG108zu jiang di le DNAjia ji zhuai yi mei yi zhi ji (DNMT1)de biao da 。(2)jin yi bu shai shua xiao fen zi zu ge ,jie guo fa xian :Vcyu RG108(ji VR)zu ge shi yong shi ,APhuo xing geng jiang ,tong shi xian zhe shang diao TET1,TET3he xian zhe xia diao DNMT1de biao da 。ling wai duo neng xing ji yin OCT4,SOX2,NANOGde biao da liang ye xian zhe di gao ,cu jin duo neng xing de wei chi 。(3)shai shua ji chu pei yang ji fa xian :DMEM/F12+10%FBS+10%KSR(DFK)de ji chu pei yang ji ming xian di gao ke long de sheng chang su du he zhi liang ,QRT-PCRjie guo xian shi gai ji chu pei yang ji jie ge VRpei yang xi bao shi ,OCT4,KLF4,NANOG,TET1biao da liang shang diao zui xian zhe 。zui zhong zai ci ji chu shang wan shan pei yang ji ,fa xian tian jia jian xing cheng qian wei xi bao sheng chang yin zi (bFGF),jin yi bu cu jin ke long zeng shi su du he xian zhe shang diao xiang guan ji yin biao da liang ,cong er que ding “DFK-VR+bFGF”(DMEM/F12+10%FBS+10%KSR+DOX+β-qiu ji yi chun +L-gu an xian an + NEAA+Vc+RG108+bFGF)wei you hua hou de pei yang ti ji 。(4)“DFK-VR+bFGF”pei yang ti ji xia huo de de giPSCsjin hang sheng wu xue jian ding he mo DOXtiao jian pei yang 。jie guo xian shi :giPSCske long yuan run tou liang ,xing tai ju long ,cheng xian shan yang zheng chang de ran se ti he xing ,gong 60tiao ran se ti 。yu dui zhao zu xiang bi ,ke long sheng chang su du kuai ,APhuo xing jiang 。xiang dui ying guang jiang du jie guo xian shi :H3K9me3de ying guang jiang du xian zhe jiang di ,duo neng xing ji yin SOX2he NANOGde ying guang jiang du xian zhe di gao 。mo DOXpei yang tiao jian xia ,“DFK-VR+bFGF”pei yang ti ji zhong neng gou zai yi ding cheng du shang wei chi ke long xing tai 。2.shan yang iPSC-likexi bao zai “DFK-VR+bFGF”yi ji dui zhao zu (GIPS)pei yang ti ji xia zhuai lu zu ce xu fen xi bi jiao gen ju ce xu jie guo ,fen xi “DFK-VR+bFGF”yu GIPSliang ge ti ji xia cha yi ji yin xian zhe fu ji de KEGGtong lu ,zhao dao zao cheng liang zu duo neng xing cha yi de guan jian xin hao tong lu ,bao gua you Wnt signaling pathway,Hippo signaling pathway,PI3K-AKT signaling pathwaydeng 。fa xian ji huo Wntxin hao tong lu you li yu duo neng xing de di sheng ,ji huo PI3K-AKTxin hao tong lu hui cu jin xi bao zeng shi 、yi zhi diao wang he cu jin tang yuan sheng cheng guo cheng 。Hippoxin hao tong lu dui yu you zhu yu giPSCsde zeng shi 、cun huo he duo neng xing de wei chi zhi guan chong yao 。zeng shang ,wo men shai shua huo de ke cu jin giPSCsduo neng zhuang tai wei chi de pei yang ti ji “DFK-VR+bFGF”,tui ce gai ti ji ke neng shi tong guo xiao fen zi hua ge wu Vche RG108jiang di xi bao zheng ti jia ji hua ,cong er cu jin duo neng xing de di sheng ,tong shi ji huo le Wntxin hao tong lu ,Hippoxin hao tong lu he PI3K-AKTxin hao tong lu fa hui chong yao zuo yong 。shang shu jie guo wei shan yang duo neng gan xi bao pei yang tiao jian de jin yi bu you hua di gong yi ding de li lun ji chu ,ye wei cu jin zhuai ji yin dong wu sheng chan yi ji chu mu ye fa zhan dian ding ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自广西大学的郑贝贝，发表于刊物广西大学2019-10-14论文，是一篇关于山羊论文,小分子论文,体系论文,多能性论文,广西大学2019-10-14论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自广西大学2019-10-14论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：山羊论文; 小分子论文; 体系论文; 多能性论文; 广西大学2019-10-14论文;