神经元分化相关蛋白Dok5和MAP1B的功能研究

论文题目: 神经元分化相关蛋白Dok5和MAP1B的功能研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物化学与分子生物学

作者: 花芳

导师: 袁建刚,强伯勤,彭小忠

关键词: 神经元分化,串联亲和纯化

文献来源: 中国协和医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 神经分化是一种高度复杂的过程，包括了基因表达多层次、多步骤的调控。胚胎瘤和神经母细胞瘤都是胚胎发育期间形成的肿瘤，维甲酸可以诱导这两种肿瘤细胞向神经元方向分化，在研究神经元分化机理时作为细胞模型得以广泛应用。 我们用维甲酸诱导神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分化，用蛋白质组学方法筛查参与分化的蛋白。通过双向蛋白电泳从中发现了73个差异表达的蛋白点，诱导分化后表达降低的有51个蛋白，分化后表达增加的有22个蛋白。经基质辅助激光解析电离—飞行时间质谱分析，最终鉴定出40个差异表达的蛋白。对这些差异表达蛋白的分析结果表明，分化过程涉及能量代谢、膜运输、mRNA合成、蛋白质合成、信号转导等。分化后的细胞中受体酪氨酸激酶c-Ret表达量明显增加。已有的研究表明Dok5可作为c-Ret的底物，促进c-Ret介导的神经突生长。而本实验室在Dok5的相关研究工作中也发现，用维甲酸诱导小鼠畸胎瘤细胞P19向神经元分化后Dok5表达量明显增加。但Dok5如何介导神经元分化目前还不清楚。 Dok5是Dok家族成员之一，该家族成员的C-端被认为是下游信号分子的结合位点，可作为活化的蛋白酪氨酸激酶诱导的信号复合物组装的分子平台。寻找其相互作用蛋白将对阐释Dok5促进神经细胞分化的分子机制提供有用信息。我们以Dok5的C-端为诱饵，利用酵母双杂交技术筛选人胎脑cDNA文库寻找其相互作用蛋白，共筛选到了132个阳性克隆，代表27种蛋白，其中包括微管相关蛋白MAP1B的轻链LC1。MAP1B是神经系统发育过程中最先表达的微管相关蛋白，通过调节微管动力学行为在神经发育和神经元分化过程中发挥重要作用。免疫共沉淀试验证明Dok5在体内能与磷酸化的LC1相互作用。用免疫荧光对Dok5和LC1的细胞内定位研究发现Dok5主要在质膜上呈不连续分布，其与LC1在共定位于细胞的质膜附近。MAP1B与Dok5的相互作用对阐释Dok5在神经系统中的功能提供了新的线索。同时我们还初步尝试了用串联亲和纯化方法寻找与Dok5相互作用的蛋白复合体以获得更多的功能信息，为全面阐释Dok5在神经元分化中的作用奠定基础。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

小结

参考文献

论文综述

附录

致谢

发布时间: 2006-10-13

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