拟南芥转录因子TDF1在花药发育过程中分子调控机理的研究

论文摘要

在拟南芥花药发育过程中,MYB家族转录因子TDF1在调控绒毡层发育及后期功能上起关键的作用。在花药发育早期,该转录因子特异性地在绒毡层,花粉母细胞和小孢子中高效表达。该基因突变体花药的体细胞早期出现空泡化现象,小孢子提前降解,导致不育。本研究利用PCR方法扩增TDF1基因并克隆到原核表达载体pET-32a。将表达载体TDF1-pET32a转入大肠杆菌BL21（DE3）,用IPTG成功诱导表达了分子量约为56KD的TDF1融合蛋白。该融合蛋白主要以包涵体形式存在,分离出包涵体后进行可溶性处理作为抗原免疫家兔。制备出的多克隆抗血清经ELISA测定效价为1：2560,Western blot检测表明该抗血清与TDF1融合蛋白识别良好。TDF1抗体的制备有助于进一步从生化水平上研究TDF1在花药发育中的功能。同时,我们通过对实验室前期实验中获得的突变体芯片数据进行分析,初步预测了TDFl上下游调控的转录因子,获得的数据对后续验证实验具有指导作用。此外,我们还获得了TDF1与TAP标签融合的转基因植株,这些工作为利用CHIP技术寻找在体内被TDF1直接调控转录的基因,进一步研究TDFl相关的花药发育分子调控机理奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1. 前言
• 1.1 转录因子
• 1.2 植物中的MYB家族转录因子
• 1.3 拟南芥中与花药发育相关的MYB转录因子
• 1.4 花药与花粉的发育过程
• 1.5 绒毡层在小孢子发育中的重要性
• 1.6 拟南芥绒毡层发育相关基因
• 1.7 绒毡层发育与功能的调控网络
• 1.8 本研究的背景,目的和内容
• 2. 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 植物材料
• 2.1.2 质粒和菌株
• 2.1.3 工具酶和试剂
• 2.1.4 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 3. 结果
• 3.1 TDF1融合蛋白表达载体的构建及鉴定
• 3.2 获得TDF1融合蛋白
• 3.2.1 TDF1融合蛋白的原核表达
• 3.2.2 包涵体的可溶性处理
• 3.3 多克隆抗体的制备与检测
• 3.3.1 多克隆抗体制备与效价测定
• 3.3.2 多克隆抗体特异性检测
• 3.4 TDF1上下游调控转录因子的预测
• 3.5 TDF1与TAP标签融合载体的构建
• 4. 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的研究成果