野生型XPD转染对胆管癌细胞生物学行为影响

论文摘要

目的:应用野生型XPD基因转染人胆管癌细胞QBC939,探讨野生型XPD基因对人胆管癌细胞的生物学影响。方法:用碱裂解法提取重组质粒pEGFP-N2-XPD和空载质粒pEGFP-N2,所提取质粒以KPNⅠ、BGIⅡ和SPHⅠ酶切鉴定。实验分四组,重组质粒pEGFP-N2-XPD组、空载质粒pEGFP-N2组、脂质体组,并用具有相同遗传背景和代数的QBC939细胞作为空白对照组。用脂质体转染法瞬时转染四组细胞。荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白报告基因表达情况。提取各组细胞总RNA,合成cDNA,用聚合酶链反应（PCR）检测四组细胞中XPD、p53、cyclinD1、c-myc表达情况,并用四甲基偶氮唑盐（MTT）和流式细胞仪检测细胞增殖及其细胞周期的变化。结果:1.RT-PCR检测pEGFP-N2-XPD、pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组细胞中XPD mRNA相对表达量分别为:0.778±0.018、0.561±0.039、0.544±0.035、0.542±0.034;pEGFP-N2-XPD细胞与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组相比,XPD mRNA表达量明显增加（P<0.01）。四组细胞中p53 mRNA相对表达量为:0.421±0.019、0.256±0.014、0.267±0.015、0.274±0.018,pEGFP-N2-XPD细胞中p53 mRNA相对表达量与三对照组比较明显升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。四组细胞中cyclinD1 mRNA相对表达量为:0.339±0.041、0.560±0.039、0.558±0.050、0.560±0.041,pEGFP-N2-XPD细胞与三对照组相比,cyclinD1 mRNA相对表达量明显降低（P<0.01）。四组细胞中c-myc mRNA相对表达量为:0.355±0.045、0.570±0.075、0.560±0.041、0.537±0.050,pEGFP-N2-XPD细胞与三对照组相比,c-myc mRNA相对表达量明显降低（P<0.01）。2.流式细胞仪检测pEGFP-N2-XPD组细胞周期G1期为81.65%,S期为11.83% ,三对照组Gl期分别为65.54%、56.61%、63.26%;S期分别为24.10%、29.52%、27.28%,结果具有统计学意义（P<0.05）。3.MTT检测示pEGFP-N2-XPD细胞生长率为0.249±0.02与三对照组相比,细胞增殖力明显减弱（P<0.01）。结论:野生型XPD基因可以抑制胆管癌细胞的生长,XPD基因可抑制cyclinD1、c-myc基因的表达,增加p53基因表达。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 细胞株和质粒来源
• 2.1.2 主要试剂和产地
• 2.1.3 仪器设备和产地
• 2.2 实验方法和步骤
• 2.2.1 胆管癌 QBC939 细胞的培养
• 2.2.2 胆管癌 QBC939 细胞的转染
• 2.2.3 流式细胞仪（重复3 次）
• 2.2.4 RT-PCR 分析
• 2.2.5 MTT 法（即四唑盐比色法）检测细胞活性（重复3 次）
• 2.2.6 统计学处理
• 第3章 结果
• 3.1 pEGFP-N2-XPD 质粒鉴定
• 3.2 pEGFP-N2-XPD 转染成功鉴定
• 3.3 pEGFP-N2-XPD 重组质粒对胆管癌 QBC939 细胞周期的影响
• 3.4 四组细胞内 XPD、p53、cyclinD1、c-myc 的表达量情况
• 3.5 MTT 结果
• 第4章 讨论
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 附带综述
• 附带论著
• 附图