论文摘要
将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae APP）全部12个血清型的国际参考菌株接种培养基大量培养,回收菌体、甲醛灭活后加入蜂胶佐剂制成疫苗,分别免疫健康的试验用白兔,获得了针对APP菌单一血清型的抗血清。虽然不同血清型之间存在着一定的交叉反应,但总是对同源菌株的菌体抗原的凝集效价最高,试验测定分别可达到6-8个log2。我们用该套血清对2003年从山东省各地分离到的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌野毒株进行了血清型鉴定,结果分别为3型（2株）、4型（1株）、5型（4株）和7型（4株）。本研究初步确定了猪传染性胸膜肺炎（porcine infectious pleuropneumonia）在山东省不同地区的流行情况;同时本研究也为今后对该病的预防控制与诊断治疗奠定了有效的基础。 参照GenBank上发表的猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniaeAPP）血清9型菌株的溶血毒素ⅠA（apxⅠA）结构基因序列,设计合成了三对特异性引物,通过PCR的方法将apxⅠA基因约3.2kb分成三段分别来扩增,共得到了三段各约1.0kb左右的片段,三个片段之间都有约100bp的重复区域。将扩增出的三个目的基因片断分别插入到原核表达载体pGEX-5X-3中,然后转化大肠杆菌BL21,经酶切、序列测定分析表明插入基因片段序列及阅读框架（ORF）完全正确,从而获得了三个各含有apxⅠA结构基因部分基因片段的重组表达性载体。通过SDS-PAGE和Western blotting分析表明,重组载体在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物经检测有免疫原性。同时我们还利用蛋白质层析技术对APP分泌的天然溶血毒素（Actinobacillus pleuropneumoniae-RTX-toxin,APX）进行了分离纯化,并获得了高纯度的溶血毒素Ⅰ（apxⅠ）,并对其生物学活性进行了初步的研究。这些研究结果将有助于建立和开发ELISA、PCR等APP的新型检测诊断方法以及研制安全有效的APP基因工程疫苗。