丹参酮ⅡA干预趋化因子MCP-1调控心肌梗死后炎症的机制研究

论文摘要

缺血性心脏病是严重危害人类健康的疾病之一。丹参酮ⅡA（TanⅡA）是活血化瘀中药丹参的主要脂溶性活性成分之一,近年来已有报道证明TanⅡA对心血管疾病有很好的治疗效果,但其对心肌梗死后炎症反应的作用,及其保护机制的研究仍然比较缺乏。本实验旨在研究TanⅡA是否对大鼠心肌梗死后的炎症反应有干预作用,并探讨其可能的作用机制。本实验分为两个部分,第一部分从整体动物水平研究TanⅡA对大鼠心肌梗死后病理变化及炎症反应的作用。方法:实验采用永久性冠状动脉结扎法（LAD）造模,动物分为模型组,药物治疗组和假手术组,造模后1周采集血流动力学数据并取材,进行血清生化指标,病理切片,基因及蛋白水平的研究;结果:TanⅡA（60 mg/kg,灌胃给药）可显著改善梗死后的心脏功能,减少梗死面积及胶原沉积;分子水平的研究表明TanⅡA可以显著减少炎症相关基因MCP-1、TGF-β1、TNF-α的表达以及其蛋白表达,同时还能够减少核因子NF-κB在细胞核中的表达。结论:TanⅡA对大鼠心肌梗死损伤有很好的保护作用,该作用与其对炎症因子MCP-1、TGF-β1、TNF-α以及核因子NF-κB的抑制作用相关。第二部分从细胞水平研究TanⅡA的抗炎作用机制。方法:分别培养SD大鼠乳鼠原代心肌细胞和成纤维细胞,采用TNF-α刺激造模,并在造模24小时后测定细胞上清及细胞中炎症相关蛋白表达。Transwell法检测MCP-1诱导的人单核细胞（THP-1）的趋化实验。结果:TanⅡA可以抑制大鼠心脏成纤维细胞的MCP-1、TGF-β1的表达,且呈剂量依赖性抑制作用。同时TanⅡA还可以提高心肌细胞表达TGF-β1,但对心肌细胞表达MCP-1无明显改善作用。TanⅡA对MCP-1诱导的单核细胞趋化性无明显抑制作用。结论:TanⅡA可以减轻由TNF-α引起的炎症因子MCP-1的表达,同时可以通过调节TGF-β1保护心肌细胞,减轻纤维化。虽然TanⅡA对MCP-1诱导的单核细胞趋化性没有明显抑制作用,但能够降低单核细胞的活性,从而缓解心肌梗死后的炎症损伤。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• ABSTRACT
• 绪论
• 第1部分 整体水平研究丹参酮ⅡA的抗炎作用
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 仪器
• 1.1.2 试剂
• 1.1.3 动物及药物
• 1.1.4 模型建立
• 1.1.5 给药及分组
• 1.1.6 取材及血流动力学检测
• 1.1.7 血清生化指标检测
• 1.1.8 病理切片研究
• 1.1.9 免疫组织化学检测炎症相关蛋白
• 1.1.10 RT-PCR检测炎症指标
• 1.1.11 Western blot检测炎症相关蛋白
• 1.1.12 Elisa试剂盒检测大鼠血清中TNF-α
• 1.1.13 统计学分析
• 1.2 结果
• 1.2.1 丹参酮ⅡA对心肌梗死后大鼠心脏形态及功能的作用
• 1.2.2 丹参酮ⅡA对心肌梗死后大鼠血清中LDH和CK-MB水平的影响
• 1.2.3 丹参酮ⅡA对心肌梗死后大鼠心脏病理变化的作用
• 1.2.4 丹参酮ⅡA对心肌梗死后大鼠心脏组织中MCP-1和NF-κB表达的作用
• 1.2.5 丹参酮ⅡA对心肌梗死后大鼠心脏组织中炎症相关基因表达的作用
• 1和PPAR-γ表达的作用'>1.2.6 丹参酮ⅡA对心肌梗死后大鼠心脏组织中CD68、TGF-β₁和PPAR-γ表达的作用
• 1.2.7 丹参酮ⅡA对心肌梗死后大鼠血清中TNF-α水平的影响
• 1.3 讨论
• 1.4 结论
• 第2部分 体外模型研究丹参酮ⅡA的抗炎作用
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 细胞及药物
• 2.1.4 原代心肌细胞、成纤维细胞的培养及鉴定
• 2.1.5 THP-1人单核细胞系的培养
• 2.1.6 MTT法检测丹参酮ⅡA对细胞活性的影响
• 2.1.7 Elisa试剂盒检测MCP-1炎症因子表达
• 1的表达'>2.1.8 Western blot检测心肌细胞、成纤维细胞中TGF-β₁的表达
• 2.1.9 单核细胞浸润体外模型的建立
• 2.1.10 丹参酮ⅡA对MCP-1诱导的单核细胞趋化作用的研究
• 2.1.11 统计学分析
• 2.2结果
• 2.2.1 丹参酮ⅡA对细胞活性的影响
• 2.2.2 丹参酮ⅡA对TNF-α诱导的MCP-1表达的作用
• 1的表达的作用'>2.2.3 丹参酮ⅡA对TGF-β₁的表达的作用
• 2.2.4 丹参酮ⅡA对MCP-1诱导的单核细胞趋化的影响
• 2.3 讨论
• 2.4 结论
• 参考文献
• 综述-单核细胞趋化蛋白-1与心肌梗死后的炎症反应
• 参考文献
• 科研成果