论文摘要
研究目的:研究微小RNA（MicroRNAs）miR-23a在TNF-α诱导的骨髓间充质干细胞凋亡以及心肌梗死（myocardial infarction，MI）中的作用，同时评价过表达miR-23a的骨髓间充质干细胞移植疗法在相关动物模型中对心肌梗死（myocardial infarction，MI）的治疗效果。研究背景及内容:骨髓间充质干细胞可用于心肌细胞的修复，从而为以心肌细胞缺损为主要病因的心肌梗死的治疗带来了新的希望。然而间充质干细胞的临床应用存在着诸多障碍，其中植入后骨髓间充质干细胞存活率较低是阻碍其临床应用的最主要障碍。TNF-α是一个重要的凋亡诱导因子，植入后体内TNF-α诱导骨髓间充质干细胞凋亡可能是一个较为主要的机理。凋亡相关的MicroRNA分子如miR-125b,miR-126, miR-23a。为了研究microRNA分子在TNF-α所诱导的间充质干细胞凋亡及心肌梗死细胞治疗中的作用，我们的研究主要涉及以下内容：在体外细胞模型中研究凋亡相关microRNA在TNF-α诱导的骨髓间充质干细胞凋亡过程中的作用，并进一步探索其作用机理。利用大鼠心肌梗死模型评价高表达miR-23a的骨髓间充质干细胞移植疗法对心肌梗死的治疗效果。研究方法:1.利用Tunel凋亡染色法评价TNF-α诱导骨髓间充质干细胞凋亡的作用，及其浓度依赖性。2.利用Real time-PCR技术研究凋亡相关的microRNAs:miR-126，miR-23a，miR-125b在骨髓间充质干细胞中受TNF-α刺激后表达量变化。3.通过在骨髓间充质干细胞内下调或高表达miR-23a，研究其在TNF-α诱导的细胞凋亡中的作用，同时研究其具体作用机制。4.利用大鼠心肌梗死动物模型，评价高表达miR-23a的骨髓间充质干细胞移植后的治疗效作用（以只表达GFP基因的骨髓间充质干细胞作为对照细胞系，过表达miR-23a的骨髓间充质干细胞为实验组细胞系），并以左室功能，以及心肌梗死面积的大小作为评价治疗效果的参数。结果：1. TNF-α以浓度依赖方式促进骨髓间充质干细胞的凋亡,浓度越高凋亡诱导效果越明显;骨髓间充质干细胞在10ng/ml TNF-α作用24小时后，miR-126和miR-125b和miR-23a三种miRNA的表达水平都有显著下降。2.成功的建立了高表达miR-23a的骨髓间充质干细胞系。3.Caspase-7是miR-23a在TNF-α诱导的骨髓间充质干细胞凋亡中的靶基因。miR-23a基因下调后细胞中caspase-7的表达量显著升高，高表达miR-23a基因的细胞，caspase-7的表达量显著降低。4.移植稳定高表达miR-23a的骨髓间充质干细胞对于心肌梗死之后的心肌损伤具有保护作用。结论:研究表明miR-23a在TNF-α诱导的骨髓间充质干细胞凋亡中具有抑制作用，其作用的发挥是通过调节caspase-7的表达来实现。高表达miR-23a的骨髓间充质干细胞能够提高大鼠心肌梗死模型的左室功能并减小梗死面积的大小。此研究为了进一步为不适于搭桥手术治疗的心肌梗死患者开发出新的综合替代疗法提供理论依据。
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标签：微小论文; 心肌梗死论文; 骨髓间充质干细胞论文; 肿瘤坏死因子论文;