新型二茂铁衍生物诱导HT1080细胞凋亡

论文摘要

由于二茂铁类衍生物具有稳定性和特定的化学特性,因此这类化合物在生物学、医学等方面得到广泛应用。为研究三种新型二茂铁类衍生物,即3-苯基-6-二茂铁基-7H-1,2,4-三唑[3,4-b]-1,3,4-噻二嗪（FTF-H）、3-对硝基苯基-6-二茂铁基-7H-1,2,4-三唑[3,4-b]-1,3,4-噻二嗪（FTF-CH3）和3-对甲基苯基-6-二茂铁基-7H-1,2,4-三唑[3,4-b]-1,3,4-噻二嗪（FTF-NO2）的抗肿瘤作用,我们在体外培养人纤维肉瘤HT1080细胞和人正常成纤维BJ细胞,MTT法测定这三种二茂铁类衍生物对细胞增殖活性的影响,计算IC50值,结果发现在24、48和72小时FTF-CH3和FTF-NO2对HT1080细胞的抑制作用要明显强于对人正常成纤维BJ细胞的抑制作用,而且在FTF-CH3和FTF-NO2对HT1080细胞的IC50值要低于对BJ细胞的IC50值,在24、48和72小时FTF-CH3对HT1080细胞的IC50分别为:108.2μM、178.0μM和130.2μM,而同时对BJ细胞的IC50分别为447.0μM、203.5μM和209.5μM;在24、48和72小时FTF-NO2对HT1080细胞的IC50分别为:202.8μM、23.0μM和15.4μM,而同时对BJ细胞的IC50分别为4479.0μM、572.5μM和79.7μM。为了进一步研究FTF-CH3和FTF-NO2对HT1080细胞的抑制作用,我们用软琼脂克隆形成实验检测了经化合物处理48小时后HT1080细胞在软琼脂上的生长能力,结果发现随着化合物浓度的升高,化合物对HT1080细胞的克隆抑制率也逐渐升高;相差显微镜观察FTF-CH3和FTF-NO2处理后的HT1080细胞形态变化,结果显示细胞出现了皱缩、变圆、彼此分离和细胞数量明显减少等特征;流式细胞术实验发现经化合物处理后,HT1080细胞被阻滞在G1期,并且随浓度升高,sub-G1期细胞明显增多,说明细胞周期被阻滞并且发生凋亡;AO/EB双染法结果显示相对于被染成均匀绿色的对照组HT1080细胞,经化合物处理后的HT1080细胞核染色质呈固缩状并且细胞核被染成绿色或橘红色或黄色,呈现早期或晚期凋亡的特征,经过统计分析后发现,随着化合物浓度的升高,细胞凋亡率逐渐升高;琼脂糖电泳结果发现经FTF-NO2处理后,细胞出现了大小不一的DNA片段,这个现象证明FTF-NO2可以诱导HT1080细胞发生凋亡;Rh123染色测定细胞线粒体膜电位（ΔΨm）,与对照组相比,经FTF-CH3和FTF-NO2处理后的HT1080细胞的线粒体膜电位随化合物浓度升高逐渐降低,这提示FTF-CH3和FTF-NO2可能是通过线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡。综上所述,FTF-CH3和FTF-NO2对人纤维肉瘤HT1080细胞的抑制作用要远高于对人正常成纤维BJ细胞的抑制作用,这种对肿瘤细胞的强抑制活性和对正常细胞的低毒作用在抗肿瘤先导化合物的筛选中具有重要意义,因此具有临床应用价值,而且它们的作用机理可能是通过线粒体途径诱导HT1080细胞凋亡从而抑制了肿瘤细胞的生长。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 一、肿瘤的发生与凋亡
• 二、二茂铁衍生物的研究进展及抗肿瘤作用
• 第二章 材料与方法
• 一、材料
• 二、方法
• 第三章 结果
• 一、MTT法测定细胞存活率
• 3和FTF-NO₂抑制了HT1080细胞的克隆形成率'>二、FTF-CH₃和FTF-NO₂抑制了HT1080细胞的克隆形成率
• 3和FTF-NO₂改变了HT1080细胞的形态学特征'>三.FTF-CH₃和FTF-NO₂改变了HT1080细胞的形态学特征
• 3和FTF-NO₂使HT1080细胞周期阻滞在G1期，并且诱导凋亡峰的出现'>四.FTF-CH₃和FTF-NO₂使HT1080细胞周期阻滞在G1期，并且诱导凋亡峰的出现
• 3和FTF-NO₂诱导HT1080细胞凋亡'>五 吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色方法检测FTF-CH₃和FTF-NO₂诱导HT1080细胞凋亡
• 2诱导HT1080细胞凋亡'>六.“DNA梯"电泳分析FTF-NO₂诱导HT1080细胞凋亡
• 3和FTF-NO₂促使HT1080细胞线粒体膜电位（△Ψm）下降'>七.FTF-CH₃和FTF-NO₂促使HT1080细胞线粒体膜电位（△Ψm）下降
• 讨论
• 参考文献
• 缩略词表
• 在读期间研究成果
• 致谢