论文摘要
第一部分CXCR4在卵巢癌的表达及与临床的关系目的检测CXCR4在卵巢癌组织及细胞株中的表达,探讨其与临床病理特征之间的关系及与β-catenin表达的相关性。方法1.免疫组织化学方法检测CXCR4、β-catenin在7例正常卵巢上皮组织及49例卵巢癌组织中的表达,分析CXCR4与临床病理特征之间的关系,Pearson’s法分析CXCR4与β-catenin表达的相关性。2.通过Real-Time PCR方法检测CXCR4在正常卵巢上皮组织、卵巢癌组织及卵巢癌细胞株中的mRNA的表达。3.通过Western blot方法检测CXCR4在正常卵巢上皮组织及卵巢癌细胞株中的蛋白的表达。结果1.CXCR4与β-catenin在卵巢癌组织中均具有异常表达,两者之间具有显著的相关性（r=0.628, P<0.001）。CXCR4的表达与卵巢癌患者的淋巴结转移密切相关（P=0.016）。2.CXCR4 mRNA在卵巢癌组织及卵巢癌细胞株CAOV3、SKOV3和A2780中均具有高表达,其表达量分别为正常卵巢上皮组织中CXCR4 mRNA表达量的（6.10±2.4）倍、（6.01±0.3）倍、（4.33±0.3）倍和（3.62±0.6）倍,P<0.001,差异均具有统计学意义。3.卵巢癌细胞株CAOV3、SKOV3和A2780中CXCR4蛋白表达比正常卵巢上皮组织高（3.51±0.08）、（2.95±0.14）、（2.82±0.10）倍,差异显著,P<0.001。结论CXCR4在卵巢癌组织及细胞株中均有高表达,与β-catenin表达显著相关,且与卵巢癌淋巴结转移密切相关。第二部分CXCR4 shRNA对卵巢癌细胞CAOV3侵袭转移影响的实验研究目的利用RNAi技术沉默CXCR4基因在CAOV3细胞株中的表达,观察干扰后CAOV3细胞增殖和侵袭能力的变化。方法1.通过RNAi技术构建4条CXCR4 shRNA表达载体,脂质体法转染至CAOV3细胞,用Real-Time PCR法及Western blot法检测shRNA对CXCR4的抑制效率。2.通过MTT方法观察CXCR4基因沉默后CAOV3细胞增殖的变化。3.应用Transwell侵袭小室方法观察CXCR4基因沉默对CAOV3细胞侵袭能力的影响。结果1.成功构建4条CXCR4 shRNA表达载体,Real-Time PCR结果表明,与shNC组相比,转染CXCR4 shRNA-151、shRNA-701和shRNA-868组CXCR4的mRNA表达分别下降了88%（P=0.005）、69%（P=0.019）和91%（P=0.003）,其中shRNA-868抑制效率最为明显。同时,Western blot结果证明shRNA-868对CXCR4蛋白的表达有明显的抑制作用,P<0.01。2.MTT方法结果表明CXCR4 shRNA对CAOV3细胞的增殖有明显的抑制作用,P<0.05。3.Transwell侵袭实验证明CXCR4基因沉默后CAOV3细胞的体外侵袭能力明显降低,P<0.01。结论CXCR4基因沉默能够抑制卵巢癌细胞株CAOV3的增殖和侵袭能力,CXCR4在卵巢癌转移中起重要作用。第三部分：干扰卵巢癌CXCR4基因调控Wnt/β-catenin通路的实验研究目的观察CXCR4基因沉默后Wnt/β-catenin通路相关基因表达的变化,探讨CXCR4在卵巢癌转移中作用机制。方法1.Real-Time PCR法检测CXCR4 shRNA对Wnt/B-catenin通路关键基因CTNNB1（编码β-catenin）、主要靶基因C-MYC、MMP-9和CD44及EMT相关基因Vimentin和SLUG的mRNA表达的影响。2.Western blot法观察特异性CXCR4 shRNA对侵袭相关基因MMP-9和Vimentin蛋白表达的影响。结果1.Real-Time PCR结果表明CXCR4基因沉默后CTNNB1、MMP-9、CD44、C-MYC、SLUG和Vimentin的mRNA表达分别下降了90.5%、26.1%、35.4%、93.5%、91.5%和78.3%,P<0.05.2.Western blot结果显示特异性CXCR4 shRNA能够显著抑制Wnt经典通路中侵袭相关基因MMP-9和Vimentin蛋白表达,P<0.01。结论CXCR4基因沉默能抑制Wnt/B-catenin通路主要相关基因的表达,CXCR4可能通过调控Wnt/B-catenin通路参与卵巢癌的侵袭转移。
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