论文摘要
目的1.研究藏药螃蟹甲的化学成分。2.建立HPLC法测定藏药螃蟹甲中环烯醚萜苷和苯乙醇苷类化合物的含量。3.研究比较螃蟹甲、独一味、糙苏和萝卜秦艽中的环烯醚萜苷和苯乙醇苷类成分和含量,为它们的进一步开发和利用提供借鉴。4.研究藏药螃蟹甲的镇痛抗炎作用。方法1.运用大孔吸附树脂、薄层层析色谱、硅胶柱色谱和反相制备型高效液相色谱等现代分离技术对螃蟹甲的化学成分进行提取、分离与纯化,得到单体化合物,然后利用理化性质和质谱、核磁共振等波谱技术鉴定化合物的结构。2.运用高效液相色谱（HPLC）法对螃蟹甲中5个环烯醚萜苷：sesamoside, shanzhiside methyl ester,7,8-dehydropenstemoside, penstemoside,8-O-acetylshan-zhiside methyl ester和3个苯乙醇苷：acteoside, alyssonoside, isoacteoside的含量进行测定。色谱柱为Symmetry C18 （4.6mm×150 mm,5μm）,检测环烯醚萜苷的流动相为乙腈-水梯度洗脱,0～5 min：7%乙腈,5～10min：7%～12%乙腈,10～40 min：12%乙腈,流速1.0 mL·min-1,柱温20℃,检测波长为235 nm；检测苯乙醇苷的流动相为甲醇：水（36：64）,HAc调pH至4.5,流速1.0 mL·min-1,柱温20℃,检测波长为330 nm。3.通过建立HPLC法测定螃蟹甲、独一味、糙苏与萝卜秦艽中的5个环烯醚萜苷：sesamoside, shanzhiside methyl ester,7,8-dehydropenstemoside,penstemoside, 8-O-acetylshanzhiside methyl ester和3个苯乙醇苷：acteoside, alyssonoside, isoacteoside的含量,来初步比较这四种药用植物中的环烯醚萜苷和苯乙醇苷类成分和含量。4.螃蟹甲水提取物小鼠一次腹腔注射给药后,采用小鼠扭体法、热板法、耳肿胀法、足肿胀法及毛细血管通透性实验等方法来观察其镇痛抗炎作用。结果1.从螃蟹甲中分离得到了14个化合物,分别为shanzhiside methyl ester （1）, sesamoside （2）,7,8-dehydropenstemoside （3）, penstemoside （4）,8-O-acetylshanzhi-side methyl ester （5）, phlomiol （6）, acteoside （7）, alyssonoside （8）, isoacteoside （9）,三十烷酸（10）,三十烷酸对羟基苯乙酯（11）,β-谷箔醇（12）,β-谷甾醇葡萄糖苷（13）和蔗糖（14）。2.环烯醚萜苷类化合物sesamoside, shanzhiside methyl ester,7,8-dehydropenstemoside, penstemoside,8-O-acetylshanzhiside methyl ester和苯乙醇苷类化合物acteoside, alyssonoside, isoacteoside分别在48～648（r=0.9993）,48～336（r=0.9995）,40～280（r=0.9994）,10～70（r=0.9996）,40～280（r=0.9997）,20-500（r=0.9996）,10～130（r=0.9995）,10～130（r=0.9997）μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系,并且平均加样回收率均在96%～104%之间,RSD均小于5%（n=6）。3.螃蟹甲、独一味、糙苏和萝卜秦艽具有相似的高效液相色谱图,并且都含有大量的环烯醚萜苷和苯乙醇苷类成分,尤其含量较大的sesamoside, shanzhiside methyl este, acteoside更是广泛分布于这四种药用植物中。4.螃蟹甲水提取物各剂量组能显著减少小鼠扭体反应的次数；只有高剂量组能延长热板所致的小鼠舔后足的时间；螃蟹甲水提取物各剂量组对小鼠耳肿胀及足肿胀均有显著的抑制作用,且能降低腹膜毛细血管的通透性,显著抑制冰醋酸所致的小鼠腹腔炎症渗出。结论1.其中化合物3,7,8,9,10,11,13,14均为首次从该植物中分离得到,特别是首次从该植物中分离得到了苯乙醇苷类化合物2.此方法简便、准确,重复性好,可以作为螃蟹甲药材的质量控制方法。3.螃蟹甲、独一味、糙苏和萝卜秦艽中具有相似的环烯醚萜苷和苯乙醇苷类成分。4.螃蟹甲水提取物具有较好的镇痛抗炎作用。