阿司匹林对去卵巢大鼠骨丢失的影响

论文摘要

目的:绝经后骨质疏松症（postmenopausal osteoprosis,PMOP）又称Ⅰ型骨质疏松症,是由于绝经后雌激素缺乏而引起的破骨细胞的骨吸收和成骨细胞的骨形成之间的失衡而发生的骨质疏松症,属原发性骨质疏松症。PMOP及骨质疏松性骨折是威胁老年妇女健康的主要问题。既往激素替代疗法（hormone replacement theropy, HRT）曾作为治疗女性绝经后骨质疏松首选,但新的研究表明,在HRT作为骨质疏松的一线用药方面,风险-受益比值不理想。因此如何有效的防治PMOP,预防脆性骨折的发生,成为医学界亟待解决的问题。而探讨PMOP发病机理以寻找一种较为安全、易得的防治药物成为目前重要研究课题之一。本实验以去卵巢大鼠建立PMOP模型,以阿司匹林（Aspirin）作为干预因素,通过检测血清前列腺素E2 （ ProstaglandinE2 , PGE2）及骨组织中环氧合酶-2 （Cyclooxygenase-2,COX-2）的表达水平,探讨阿司匹林防治去卵巢大鼠骨丢失的可能性,从而为阿司匹林防治绝经后骨质疏松症（Postmenopausal osteoporosis,PMOP）提供理论依据。方法:1动物分组和PMOP动物模型制备3月龄成年雌性Sprague/Dawley大鼠50只,随机分为5组,每组10只:①假手术（Sham）组、②卵巢切除（OVX）组、③卵巢切除+尼尔雌醇（OVX+E）组、④卵巢切除+中剂量阿司匹林（OVX+MAP）组、⑤卵巢切除+低剂量阿司匹林（OVX+LAP）组。将大鼠以10%水合氯醛（0.35ml/100mg体重）腹腔注射麻醉,无菌条件下,经腰背部正中纵行切口进入腹腔背侧,将②-⑤组大鼠切除双侧卵巢,①组大鼠切除双侧卵巢下方少许脂肪组织,重量约与卵巢相同。术后给以青霉素预防感染,于去卵巢术后7天起,分别对各组大鼠进行灌胃给药,共12周。OVX+E组给予尼尔雌醇1.0mg·kg-1·w-1,OVX+MAP组给予以阿司匹林45mg/kg·d灌胃,OVX+LAP组给予以阿司匹林9mg/kg·d灌胃,Sham组及OVX组分别给予同体积0.9%氯化钠注射液,每日1次。给药剂量每周按体重校正1次。2双能X线吸收法确立PMOP动物模型于去势后12周,分别取各组大鼠置于Osteocore3型双能X线骨密仪上,通过计算机系统中心动物软件,测量每只大鼠双侧股骨、腰椎骨密度（BMD）,取平均值。BMD值用g/cm2表示。3苏木素-伊红（HE）染色及免疫组织化学染色、ELISA动物大鼠心脏取血2ml后处死后,立即无菌操作取左侧股骨下段,进行HE染色、免疫组织化学染色及观察。ELISA方法测定血清PGE2水平。4结果判定与图像分析统计学分析实验结果应用SPSS17.0软件统计分析。所测数值均以均数±标准差（X-±S）表示,方差齐性检验采用Levene法,各组间变量比较采用完全随机的单因素方差分析,并采用SNK法进行两两比较;相关性分析用pearson积差相关分析。P<0.05被认为差异有统计学意义。结果:1各组大鼠股骨BMD比较与Sham组相比,OVX组全身骨密度下降,差异有统计学意义（ P <0.01）,提示骨质疏松模型建立成功;与OVX组相比,OVX+E组、OVX+MAP组及OVX+LAP组大鼠BMD增加（P<0.01;P<0.05;P<0.05）;与OVX+E组相比,OVX+MAP组、OVX+LAP组大鼠BMD无明显差别（P>0.05）。与OVX+LAP组相比OVX+MAP组大鼠BMD增加（P<0.05）。2骨组织学观察:（1）Sham组:骨小梁丰富,形态结构完整,排列密集、有规则,小梁排列以纵向为主,连接呈网状,骨小梁间距小,皮质骨致密。（2）OVX组:骨小梁总量较Sham组明显减少,排列稀疏,网状结构缺如,出现大量骨小梁盲端,小梁壁的厚度不一致,骨小梁间距增宽,皮质骨变薄。（3）OVX+E组大鼠与Sham组相似,OVX+MAP组骨小梁粗细均匀,分布均匀,连续性好,较OVX组在骨小梁的数量、宽度、长度以及分布上都有大幅度改善,OVX+LAP组骨小梁多且粗、排列有序,连续性较好,较OVX组明显改善。3免疫组织化学染色结果观察:COX-2蛋白在骨组织及骨髓中的表达特征:COX-2阳性信号主要位于骨小梁周边的成骨细胞中。OVX组骨小梁周边阳性细胞数明显多于Sham组、OVX+E组、OVX+MAP组及OVX+LAP组,且表达强于上述四组。4 ELISA测定血清PGE2水平结果。与Sham组相比,OVX组、OVX+MAP组及OVX+LAP组血清PGE2升高（P<0.01;P<0.05;P<0.05）,OVX+E组大鼠血清PGE2差异无统计学意义（P>0.05）;与OVX组相比,OVX+E组、OVX+MAP组及OVX+LAP大鼠血清PGE2降低（P<0.01;P<0.05;P<0.05）;与OVX+E组相比,OVX+MAP、OVX+LAP组大鼠血清PGE2无明显差别（P>0.05;P>0.05）。与OVX+LAP组相比OVX+MAP组大鼠血清PGE2降低（P<0.05）。5相关性分析:OVX组、OVX+LAP组以及OVX+MAP组大鼠骨组织中, COX-2表达与BMD呈负相关（r=-0.732,P<0.05）及（r=-0.692,P<0.05）,而Sham组及OVX+E组大鼠骨组织中,COX-2蛋白表达水平与BMD间均无明显相关性。OVX组、OVX+LAP以及OVX+MAP大鼠血清中PGE2与BMD呈负相关（r=-0.645,P<0.05）及（r=-683,P<0.05）,而Sham组及OVX+E组大鼠骨组织中,血清中PGE2与BMD间均无明显相关性。结论:1 PMOP模型建立。2阿司匹林使用可显著减低OVX大鼠COX-2的表达,从而阻止OVX导致的骨丢失,而该作用可能是通过抑制COX-2的表达来实现的,COX-2可作为判定防治PMOP疗效的一种细胞因子而应用于临床。3阿司匹林的使用导致OVX大鼠血清PGE2水平降低,PGE2可作为临床上判定防治PMOP疗效的一种免疫因子。4阿司匹林阻止了OVX导致的骨丢失,且中剂量组优于低剂量组。其分子机制可能是通过抑制COX-2活性,调节PGE2的形成实现的。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 阿司匹林对去卵巢大鼠骨丢失的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 环氧合酶-2 与绝经后骨质疏松症关系的研究进展
• 致谢
• 个人简历