小麦多基因转化后代鉴定

论文摘要

小麦赤霉病是世界范围内小麦的重要病害,每年给小麦的生产造成了巨大的损失,我国的长江流域,华南冬麦区及东北春麦区小麦赤霉病危害严重。本研究通过分子检测和田间接种赤霉病菌两种途径,对转基因小麦扬麦11（L3株系）的所有T3代植株进行基因和抗病性鉴定。L3株系为本实验室2009年通过基因枪多最小表达框共转化得到的阳性株系,含有四种基因分别是ACE-D2、MsrA1、Pep3、Defensin。PCR结果表明,T3代存在三种基因型植株即含有ACE-D2、MsrA1、Pep3、Defensin四个基因（Ⅰ型）、含有ACE-D2、MsrA1两个基因（Ⅱ型）、含有Pep3、Defensin两个基因（Ⅲ型）。T3代存在大量的基因丢失现象,但是基因分离现象很少,相对稳定。对三种基因型的材料进行Southern杂交后和预想结果相吻合,外源基因确实整合至基因组,Ⅱ型和Ⅲ工型为工型的基因分离的结果。小麦赤霉病菌单花接种试验结果表明,扬麦11转基因植株在抗赤霉病扩展方面明显优于未转基因植株,与苏麦3号无显著差异。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略语表
• 1 前言
• 1.1 小麦赤霉病的病原致病性
• 1.1.1 引起小麦赤霉病的病原菌
• 1.1.2 镰刀菌的致病性
• 1.1.3 小麦赤霉病菌产生毒素的研究
• 1.2 小麦赤霉病的发生与流行规律
• 1.2.1 气候因素
• 1.2.2 接种物
• 1.2.3 小麦生长阶段
• 1.3 小麦赤霉病的防治
• 1.3.1 小麦赤霉病耕作管理防治
• 1.3.2 小麦赤霉病的化学防治
• 1.3.3 小麦赤霉病的生物防治
• 1.4 小麦对赤霉病抗病类型和鉴定方法
• 1.4.1 小麦对赤霉病的第Ⅰ和第Ⅱ类抗病类型及鉴定方法
• 1.4.2 小麦的其他抗病类型及鉴定方法
• 1.5 抗菌肽
• 1.5.1 本研究中的抗菌肽
• 1.6 scFv融合蛋白
• 1.6.1 本研究中的scFv融合蛋白
• 1.7 多最小表达框共转化研究进展
• 1.8 研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 转基因小麦植株
• 2.1.2 小麦基因组DNA提取所需试剂
• 2.1.3 用于PCR鉴定的引物
• 2.1.4 Southern杂交试剂
• 2.1.5 田间接种菌株材料
• 2.1.6 主要仪器设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 小麦叶片基因组DNA的提取
• 2.2.2 PCR扩增
• 2.2.3 杂交探针制备
• 2.2.4 小麦Southern杂交和显影
• 2.2.4.1 小麦基因组DNA酶切和电泳
• 2.2.4.2 琼脂糖凝胶转膜
• 2.2.4.3 预杂交
• 2.2.4.4 杂交
• 2.2.4.5 洗膜
• 2.2.4.6 放射自显影
• 2.2.5 小麦赤霉病田间接种
• 2.2.6 小麦赤霉病的田间调查
• 2.2.6.1 单花接种调查方法
• 2.2.6.2 小麦赤霉病调查结果的统计分析
• 3 结果与分析
• 3.1 T2代和T3代植株PCR鉴定
• 3.2 T3代转基因小麦Southern杂交分析
• 3.3 T3代转基因小麦田间赤霉病接种鉴定
• 4 讨论
• 4.1 多最小表达框共转化
• 4.2 转基因小麦与抗赤霉病育种
• 参考文献
• 致谢