罗格列酮保护糖尿病大鼠肾损害及其对肾组织单核趋化蛋白-1表达的影响

论文摘要

目的越来越多的国内外学者认为糖尿病肾病是一种炎症性疾病,其疾病的各个阶段在肾组织都伴有白细胞的浸润。趋化因子可参与招募炎症细胞亚群到局部肾组织,其中的单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）具有招募单核/巨噬细胞（M/M）的重要作用,这一观点已经在糖尿病肾病动物模型以及1型和2型糖尿病患者肾活检中多次被证实。浸润的M/M释放各种物质包括溶酶体酶、一氧化氮、反应氧中介物或转化生长因子-β1等介导肾脏局部的炎症反应,导致肾脏固有细胞增生,细胞外基质聚集,伴或不伴有肾小管纤维化,最终导致肾小球硬化。噻唑烷二酮类（TZDs）是一类通过能刺激过氧化物质体増殖活化受体γ增强胰岛素敏感性,减少胰岛素抵抗达到控制血糖目的的药物,它可以通过多种机制保护肾脏,包括降糖、降压、改善血管内皮功能、抗增殖及改变肾血流动力学等多个方面。近年来,各国学者开始关注TZDs的抗炎作用在糖尿病肾脏中的保护作用。据文献报道,TZDs可减少肾脏系膜细胞中白介素-1（IL-1）介导的IL-6和肿瘤坏死因子-α表达增加;还可通过降低核因子κB的活性和MCP-1的生成从而抑制单核细胞的趋化;另外,TZDs还具有减少肾组织内氧化应激的作用。本实验旨在观察马来酸罗格列酮（TZDs类抗糖尿病药物）对链脲霉素（STZ）诱导的糖尿病大鼠肾脏保护作用及其对尿MCP-1排泄和肾组织MCP-1mRNA表达的影响,探讨其保护肾损害的机制。方法将Wistar大鼠随机分为正常对照（C组,n=8）、糖尿病组（D组, n=8）、罗格列酮治疗组（R组,n=8）。大鼠禁食24h后,D、R组单次腹腔注射链脲霉素[0.1mol/L无菌枸橼酸缓冲液配制为6.5mg/ml（PH 4.3）]65 mg/kg。48h后采空腹尾静脉血测血糖,以德国罗氏血糖仪测血糖≥16.7mmol/L者,入选糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠模型建立一周后,R组以马来酸罗格列酮（5mg?kg-1?d-1）灌胃,D组和C组灌以相应量的生理盐水。第2,4,8周检测各组大鼠尾外周血糖,第8周时以代谢笼收集12小时的尿液,测定尿白蛋白（ALB）、视黄醇结合蛋白（RBP）和MCP-1的排泄水平,计算其排泄率。之后,处死大鼠,在宰杀大鼠的同时从股动脉取血用于测定糖化血红蛋白（HbA1c）。留取肾脏标本,左肾用于称重、计算肾脏肥大指数=左肾重/体重（mg·g-1）,右肾部分用于病理学检查,部分立即放置于液氮中待提取RNA,用于逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）,对肾脏组织中的MCP-1进行半定量及相对定量测定,分别采用MCP-1/GAPDH的光密度比值和??Ct相对定量法计算目的基因的含量（目的基因量=2-??Ct）。结果①血糖和糖化血红蛋白:第2,4,8周,D、R组的血糖与C组的血糖比较,明显升高（ P<0.01）,而D组和R组两组间无统计学差异（ P>0.05）。与C组比较,D组和R组第8周的糖化血红蛋白水平均明显升高（ P<0.01）,但后两组之间的数值差异无统计学意义。②尿ALB、RBP和MCP-1排泄率和肾脏肥大指数:第8周,D、R组的尿ALB排泄率（UAER）,尿RBP排泄率和MCP-1排泄率与C组各值间有统计学差异（P<0.01）;第8周,D、R组肾脏肥大指数也明显高于C组（P<0.01）;与D组比较,R组中上述四项指标均明显降低（ P< 0.01）。此外,尿MCP-1排泄率与UAER（r=0.945 ,P<0. 01）、尿RBP排泄率（r=0.879,P<0.01）及肾脏肥大指数（r=0.934,P<0.01）呈正相关。③电镜结果:C组结构清晰,无异常病理表现;D组肾小球毛细血管基底膜增厚,系膜细胞肿胀,系膜基质增多,系膜区扩大;R组较D肾脏病理改变明显减轻,同C组相比仅有少量病变,基底膜基本均匀一致,足突融合率明显降低。④RT-PCR和Real-time PCR结果:在RT-PCR扩增产物的电泳条带中,D、R组条带亮度明显强于C组条带,其与管家基因GAPDH的光密度比值结果提示与C组相比,D组大鼠肾脏MCP-1mRNA表达明显上调（P<0.01）,R组MCP-1mRNA表达也增加（P<0.05）,但较D组有明显的下调（P<0.05）。Real-time PCR法同样得出相似的结论,与C组比较,D、R组MCP-1mRNA基因的表达量高于C组（P<0.01或P< 0.05）。经罗格列酮治疗后,MCP-1在肾脏中的表达明显下调（与C组比较,P<0.05或P<0.01）。结论罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏具有确切的保护作用,可以降低ALB和RBP在尿液中的排泄,降低肾脏肥大指数,减轻肾脏的病理改变,其机制可能部分与其抑制肾脏局部MCP-1过度表达,减少尿MCP-1排泄有关,而且其作用是独立于降血糖效应的。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录一：中英文缩写对照表
• 附录二：个人简历
• 致谢
• 综述
• 参考文献