去乙酰化酶Sirt1对细胞程序性坏死的调控机制

去乙酰化酶Sirt1对细胞程序性坏死的调控机制

论文摘要

凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)是一种存在于线粒体膜间隙中的保守的黄素蛋白,广泛存在于多种组织和细胞中。它具有FAD依赖性的NADH氧化还原酶活性,在正常情况下AIF定位在线粒体内参与线粒体的氧化还原反应、维持线粒体结构。但是在凋亡信号刺激下AIF被钙调蛋白酶或组织蛋白酶切割形成一种可溶性蛋白,从线粒体中释放进入细胞质再穿梭入核,在细胞核中与CypA和rH2AX结合,以一种不依赖于caspase的方式在细胞核内引起染色体的凝集和DNA的大片段化(50kbp),最终导致细胞凋亡。AIF诱导的细胞凋亡为我们进一步了解凋亡的发生机制提供了新的靶点。Sirtl是一种NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)依赖性的去乙酰化酶,可以去乙酰化组蛋白和非组蛋白,属于第三类组蛋白去乙酰化酶(HDACs),与Sir2(酵母沉默信息调节因子2)具有同源性较高,在哺乳动物细胞中广泛存在。Sirtl能够与多种蛋白因子相互作用,参与多种细胞生理功能的调节过程,比如细胞衰老、凋亡、神经保护、糖脂类代谢、炎症氧化应激等。在本课题研究中,我们发现了Sirt1的一种新的结合蛋白。研究发现该蛋白是AIF,且在信号凋亡刺激下AIF与Sirtl的结合增强,内源性的AIF和Sirtl也会发生共定位现象。细胞发生凋亡时,AIF的乙酰化水平升高,但是当外源Sirtl过量表达时,Sirt1能够对AIF发挥其去乙酰化功能。Sirt1还能够干扰AIF与CypA的结合及AIF介导的DNA大片段化过程。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 综述
  • 第一节 凋亡诱导因子
  • 1. 凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)
  • 2. AIF的生理功能
  • 3. AIF的同源蛋白
  • 4. 展望
  • 第二节 去乙酰化酶Sirt1
  • 1. Sirt1的结构与分布
  • 2. Sirt1的作用机制
  • 3. Sirt1的活性调控机制
  • 4. Sirt1的生理作用
  • 第二章 材料与方法
  • 第一节 实验材料与仪器
  • 1. 细胞株与菌株
  • 2. 质粒
  • 3. 载体及引物
  • 4. 实验试剂、药品及抗体
  • 5. 实验仪器
  • 第二节 实验原理与方法
  • 1. 质粒的构建
  • 2. 细胞的传代培养、冻存与复苏
  • 3. 细胞转染
  • 4. 慢病毒包装
  • 5. 稳定表达细胞株的构建
  • 6. Western Blot
  • 7. 免疫荧光染色
  • 8. 免疫共沉淀技术
  • 9. 基因组DNA提取
  • 第三章 结果与分析
  • 第一节 Sirt1新的结合蛋白的确定
  • 第二节 凋亡信号刺激下Sirt1与AIF的结合和共定位
  • 第三节 AIF乙酰化水平的确定
  • 第四节 Sirt1对AIF发挥其去乙酰化功能
  • 第五节 Sirt1对细胞程序性坏死的影响
  • 第四章 讨论
  • 肥胖关键因子KLF14对细胞代谢的调控
  • 第一章 KLF14
  • 第二章 材料与方法
  • 第一节 实验材料与仪器
  • 第二节 实验方法与原理
  • 1. 流式细胞术
  • 2. 反转录PCR(RT-PCR)
  • 第三章 结果与分析
  • 第一节 KLF14阻滞细胞周期
  • 第二节 KLF14将细胞周期阻滞在G2/M期
  • 第三节 KLF14阻滞细胞周期的机制
  • 第四节 KLF14与细胞凋亡的关系
  • 参考文献
  • 附录Ⅰ
  • 致谢
  • 相关论文文献

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