论文题目: 转染抑癌基因KLF6对前列腺癌PC-3细胞作用的实验研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 孙明
导师: 杨宇如,李虹,魏强,王佳
关键词: 前列腺癌,抑癌基因,重组质粒,转化,转染,凋亡,细胞周期,基因治疗
文献来源: 四川大学
发表年度: 2005
论文摘要: 近来发现野生型抑癌基因KLF6在前列腺癌中的突变率高达77%,且有高度特异性。本研究克隆了野生型KLF6基因,将其重组质粒转染入前列腺癌PC-3细胞,观察了KLF6对PC-3细胞生长增殖、细胞周期、对Bcl-2和Cyclin D1蛋白表达的影响等,分四个部分简述如下。 第一部分:抑癌基因KLF6的克隆及质粒的构建 [目的] 从正常人体中提取总RNA,利用RT-PCR法反应获得目的基因野生型KLF6的cDNA片断,构建具备可进行细胞转染和容易被识别筛选的KLF6-pEGFP-C1质粒载体。 [材料和方法] 应用Trizol法从人体正常肝脏细胞中提取mRNA,按GeneBank公布的野生型KLF6基因序列及文献设计引物序列:5’端引物:5’-AAGGTACCATGGACGTGCTCCCTATGTGC-3’;3’端引物:5’-CGTCTAGATCAGAGGTGCCTCTTCATGTG-3’。RT-PCR反应在94℃lmin,60℃1.5min,72℃2min,最后在72℃延伸8min条件下进行30个循环,获得852bp大小的野生型KLF6的cDNA片段pKLF6。pKLF6用内切酶BamH I和EcoR I双酶切,真核表达载体pEGFP-C1同样用BamH I和EcoR I双酶切,二者进行连接反应,构建包含目的基因KLF6的重组质粒pEGFP-C1-KLF6。 [结果] 使用Trizol法分离和提取得到正常人体的总RNA,通过RT-PCR法反应获得目的基因野生型KLF6的cDNA片断,构建完成了能够稳定表达和具有筛选特征的KLF6-pEGFP-C1质粒载体,使其成为可进行细胞转染和易被识别的穿梭质粒,供后续转染和表达实验使用。 [结论] Trizol法简便快速地提取到正常人体的总RNA,RT-PCR法反
论文目录:
缩略词表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
第二部分
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
第三部分
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
第四部分
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
小结
综述
致谢
发布时间: 2005-11-09
参考文献
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标签：前列腺癌论文; 抑癌基因论文; 重组质粒论文; 转化论文; 转染论文; 凋亡论文; 细胞周期论文; 基因治疗论文;