论文摘要
目的:观察大黄酸-哌嗪雌酚酮（Lc）对去卵巢大鼠骨量、骨强度和形态微结构、骨羟脯氨酸和钙含量以及对子宫增殖的影响,评价大黄酸-哌嗪雌酚酮抗骨质疏松活性;检测骨和子宫组织中ERα、ERβmRNA的表达水平,从受体角度探讨Lc抗骨质疏松活性及对子宫的可能作用机制。方法:6月龄Wistar雌性未孕大鼠72只,按体重随机分为6组:假手术组（Sham）、模型组（OVX）、雌酚酮组（E）、Lc高剂量组（H-Lc）、Lc中剂量组（M-Lc）、Lc低剂量组（L-Lc）,各组均经背侧入路行双侧卵巢切除,Sham组仅切除卵巢旁少量脂肪组织,术后一周灌胃给药,E组给予雌酚酮1.07mg/kg·d,H-Lc、M-Lc和L-Lc组分别给予Lc 1.028mg/kg·d、0.514mg/kg·d和0.257mg/kg.d, Sham、OVX组给予等体积溶媒液。灌胃给药24周后,双能骨密度仪全身扫描测定大鼠活体骨密度;处死大鼠,收集血液,测量血清雌二醇浓度;取子宫,称重并计算子宫系数,取约1cm长子宫组织,HE染色作形态学观察;取左侧股骨远端干骺端行骨计量学测定,右侧股骨行骨生物力学测定,断裂后经水解行羟脯氨酸和骨钙含量测定;剩余子宫及右侧胫骨近端液氮速冻后转移到-80℃冰箱中保存,RT-PCR技术检测ERα、ERβmRNA的表达水平。结果:1.骨密度和骨矿含量变化:卵巢切除使大鼠全身及各部位骨密度和骨矿含量明显下降（P<0.01）;三种剂量的Lc和雌酚酮一样,均明显提高大鼠全身及脊柱、肋骨、骨盆骨密度和骨矿含量（P<0.01）,低剂量Lc同时提高头部骨密度和上肢骨密度（P<0.01）。2.股骨生物力学改变:去卵巢后,大鼠股骨最大压缩载荷、最大压缩应力、弹性模量均明显降低（p<0.05）;给予雌酚酮后,提高股骨的最大压缩载荷、最大压缩应力、弹性模量、断裂时载荷、断裂时应力;三种剂量的Lc均提高股骨最大压缩载荷、最大压缩应力、断裂时载荷、断裂时应力,各组之间无明显差异,L-Lc组弹性模量亦明显增加。3.股骨羟脯氨酸和骨钙百分含量变化:去卵巢大鼠股骨羟脯氨酸百分含量下降;三个不同剂量Lc和雌酚酮能明显提高羟脯氨酸百分含量（p<0.05）;各组骨钙百分含量同OVX组无明显差异（P>0.05）。4.股骨远端形态学观察及计量学测量:去卵巢组大鼠股骨远端骺板下骨小梁结构排列稀疏,连接性差,总量明显减少（p<0.01）,出现大量骨小梁盲端,计量学指标显示骨转换增高。雌酚酮和三种剂量Lc能明显提高去卵巢大鼠骨小梁体积（p<0.01）;计量学指标三种剂量Lc抑制去卵巢后骨的高转换状态。5.血清雌二醇改变:与Sham组比较,OVX组明显降低,雌酚酮和高、中剂量Lc可使大鼠去卵巢后血清雌二醇明显升高（P<0.01）,低剂量组与OVX组无明显差别（p>0.05）。6.子宫系数及形态学改变:大鼠去卵巢后子宫明显萎缩,子宫重量、子宫系数、子宫直径、内膜厚度明显减少,雌酚酮能够促进子宫增生,重量增加,内膜明显增厚（P<0.01）,三种剂量Lc对子宫内膜增生无明显刺激作用,子宫重量、子宫系数、子宫直径、内膜厚度与OVX组无明显差别（p>0.05）。7.Lc对胫骨近端ERα、ERβmRNA表达的影响:Sham组胫骨近端ERαmRNA和ERβmRNA均有表达;而OVX组仅检测到ERβmRNA的表达,相对表达水平低于Sham组;E组检测到ERα、βmRNA的表达,ERβmRNA的表达水平高于OVX组,ERαmRNA和ERβmRNA水平均与Sham组无差异;H-Lc、M-Lc、L-Lc组仅检测到ERβmRNA的表达,各组之间无明显差异,相对表达量高于OVX组,但均低于E和Sham组。8.大黄酸-哌嗪雌酚酮对子宫ERα、ERβmRNA表达的影响:各组均检测到ERαmRNA的表达,OVX组表达水平明显低于Sham组;E组表达水平高于OVX组,与Sham组无明显差别;Lc各组与OVX组之间ERαmRNA表达无明显差异,但均低于E和Sham组; Sham、E、H-Lc、M-Lc四组检测到ERβmRNA的表达;OVX、L-Lc组未检测出ERβmRNA的表达。结论:1.实验三个剂量Lc对去卵巢大鼠均能提高骨量、增强骨强度、改善骨形态结构,且对子宫无明显增殖作用。低剂量还改善骨的力学性能,在抑制骨的转换率方面优于高剂量。2. Lc与E对骨及子宫作用差异的原因之一可能是E对去卵巢大鼠子宫和骨的两种ER亚型均能上调,而Lc则选择性上调ERβmRNA的表达;ERβ在维持骨质方面具有重要作用,ERα在维持子宫内膜方面扮演着更重要的角色。