免疫共振散射光谱法分析人尿微量白蛋白

论文摘要

第一部分绪论介绍了免疫分析的原理、种类,以及胶体金的制备、表征和胶体金标记在免疫分析中的应用;综述了共振散射光谱的有关理论、特点、分析应用及发展趋势;介绍了尿微量白蛋白的产生机理、临床意义以及分析进展。第二部分简便快速灵敏测定人尿微量白蛋白的免疫共振散射光谱新方法在pH 4.4的Na2HPO4-C6H8O7缓冲溶液和聚乙二醇（PEG-6000）存在下,尿微量白蛋白（Malb）与羊抗人尿微量白蛋白（Goat anti-Malb）发生特异性反应生成免疫复合物微粒,导致体系在488nm处的共振散射峰增强。据此,建立了一个测定Malb的免疫共振散射光谱法。Malb的浓度在0.03～0.96μg/mL的范围内,与488nm处的共振散射强度增加值ΔI488nm呈线性,呈线性,其回归方程为:ΔI488n=116.0C-2.1,相关系数为0.9991,检测限为0.02μg/mL Malb。该方法用于定量分析正常人尿中微量白蛋白,相对标准偏差在1.3-4.6%之间,同时具有简单、快速的特点,得到的结果较为满意。第三部分快速灵敏检测人尿微量白蛋白的猝灭型金标免疫共振散射光谱探针采用柠檬酸钠还原法制备了粒径约为10.0nm的胶体金颗粒,在pH 6.5条件下用其标记Goat anti-Malb获得了一个简便快速灵敏的尿微量白蛋白（Malb）免疫共振光散射光谱探针。在pH为5.2的C6H8O7-Na2HPO4缓冲溶液中及聚乙二醇（PEG-4000）存在下,金标记anti-Malb发生非特异性聚集并在577nm处有一个最强的共振散射峰。在非特异性聚集金标记anti-Malb中加入Malb,两者发生特异性反应生成免疫复合物并沉降,导致体系在577nm处的共振散射强度急剧降低,Malb的浓度在4-128ng/mL范围内与共振散射降低值ΔI577nm呈线性关系,回归方程为ΔI577nm=703.9CMalb+39.96、相关系数0.9983、检测限为3.2ng/mL,此方法用于检测人尿样中的微量白蛋白,结果满意。第四部分免疫纳米金催化-氧化亚铜增强共振散射光谱检测人尿微量白蛋白在pH 6.5条件下用金纳米颗粒标记Goat anti-Malb获得Malb免疫共振散射光谱探针。本文在pH 5.0 Na2HPO4-C6H8O7缓冲溶液中,Goat anti-Malb发生非特异性聚集,加入Malb后,Goat anti-Malb与Malb发生特异性反应,生成胶体金标免疫复合物分散于溶液中。以16000rpm高速离心分离后,上清液中含有免疫金或胶体金免疫复合物,取适量上清液作为催化晶种,在0.69mg/mL CuSO4,1.0mg/mLNaOH（含13.84mg/mL酒石酸钾钠）,0.088mg/mL葡萄糖溶液,70℃条件下反应6min条件下,催化葡萄糖还原CuSO4生成Cu2O沉积在晶种表面,形成大粒径的纳米复合物,在610nm处共振散射信号剧急增大。结果表明,在一定范围内随着Malb浓度的增大,上层清夜中晶种微粒数增多,I610nm值增大。CMalb在0.014-0.43ng/mL范围内与△I610nm存在良好的线性关系,回归方程为:△I610nm=279.72CMalb+10.87,相关系为0.993,检出限为7.2pg/mL。该法用于尿样中微量白蛋白的检测,结果满意,其回收率在92.1-115.7%之间。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 绪论
• 1 免疫分析概述
• 1.1 免疫分析的原理
• 1.2 免疫分析的种类
• 1.3 基于胶体金标记的免疫分析技术
• 1.3.1 胶体金的结构与性质
• 1.3.2 胶体金的制备
• 1.3.3 胶体金的表征
• 1.3.4 免疫胶体金的标记
• 1.3.5 胶体金的标记的应用
• 2 共振散射的概述
• 2.1 散射光的理论
• 2.2 散射光的分类
• 2.3 共振散射光的定量基础
• 2.4 共振散射光谱法的特点
• 2.5 共振散射光谱法的研究应用
• 2.5.1 共振散射光谱法在核酸分析中的应用
• 2.5.2 共振散射光谱法在蛋白质分析中的应用
• 2.5.3 共振散射光谱法在药物分析中的应用
• 2.5.4 共振散射光谱法在环境分析中的应用
• 2.5.5 共振散射光谱法在液相纳米微粒及催化作用的应用
• 2.5.6 共振散射光谱法在免疫分析中的应用
• 2.6 共振光散射技术的发展趋势
• 3 尿微量白蛋白的概述
• 3.1 尿微量白蛋白的分子结构和产生机理
• 3.2 尿微量白蛋白的临床意义
• 3.2.1 尿微量白蛋白与高血压
• 3.2.2 尿微量白蛋白与糖尿病
• 3.2.3 尿微量白蛋白与肾病
• 3.2.4 尿微量白蛋白与心血管疾病
• 3.3 尿微量白蛋白的分析进展
• 3.3.1 免疫比浊法
• 3.3.2 酶联免疫分析法
• 3.3.3 放射免疫分析法
• 3.3.4 荧光免疫分析法
• 3.3.5 化学发光免疫分析法
• 3.3.6 高效液相色谱和毛细管电泳分析法
• 3.3.7 其他方法
• 4 本课题研究的工作内容
• 5 本课题研究的意义
• 6 参考文献
• 第二部分 简便快速灵敏测定尿微量白蛋白的免疫共振散射光谱新方法
• 1 前言
• 2 实验部分
• 2.1 试剂与仪器
• 2.2 实验方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 原理
• 3.2 共振散射光谱
• 3.3 紫外-可见光谱
• 3.4 条件优化
• 3.5 线性关系
• 3.6 共存物质的影响
• 3.7 样品的测定
• 4 结论
• 5 参考文献
• 第三部分 快速灵敏检测尿微量白蛋白的猝灭型金标免疫共振散射光谱探针
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.2 胶体金的制备以及质量鉴定
• 2.3 Malb免疫共振散射光谱探针的制备
• 2.3.1 胶体金标记抗体pH的选择
• 2.3.2 胶体金标记anti-Malb用量的确定
• 2.3.3 anti-Malb的纳米金标记
• 2.4 实验方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 原理
• 3.2 透射电镜图
• 3.3 激光散射图
• 3.4 紫外可见吸收光谱
• 3.5 荧光光谱
• 3.6 共振散射光谱
• 3.7 条件的优化
• 3.8 线性关系
• 3.9 共存物质的影响
• 3.10 样品的测定
• 4 结论
• 5 参考文献
• 第四部分 免疫纳米金催化-氧化亚铜增强共振散射光谱检测人尿微量白蛋白
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.2 胶体金的制备以及质量鉴定
• 2.3 Malb免疫共振散射光谱探针的制备
• 2.4 实验方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 原理
• 3.2 透射电镜图
• 3.3 吸收光谱
• 3.4 共振散射光谱
• 3.5 条件优化
• 3.6 线性关系
• 3.7 共存物的影响
• 3.8 样品及回收率的测定
• 4 结论
• 5 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 致谢