论文摘要
甘丙肽（Galanin，GAL）是一个29—30个氨基酸的酰基化神经肽。它广泛分布于中枢神经系统，对神经发生和神经损伤修复起到一定的调节作用。在神经发生和神经损伤修复过程中，神经细胞的增殖是重要环节，本文运用几种可增殖神经类细胞（神经干细胞、PC12细胞、B104细胞），检测GAL及其受体（GalR1、GalR2和GalR3）在该类细胞中的表达特性，并探讨GAL对该类细胞增殖的影响。由此推测它在中枢系统中可能起到的调节作用。实验分四部分：第一部分，分离E14 SD大鼠胚胎的前脑室下带（SVZ）区域的细胞，接种于含bFGF、B27的DMEM/F12的无血清培养基中。用Nestin单克隆抗体检测未分化的细胞。在诱导细胞分化后，分别进行MAP2、GFAP、CNP免疫组化检测，分别鉴定神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞多种分化细胞。确定获得的是神经干细胞。同时，培养PC12细胞和B104细胞，为进行后面的研究提供稳定的细胞来源。第二部分，为了检测体外培养的神经干细胞，PC12细胞和B104细胞是否表达GAL及其三种受体——GalR1、GalR2和GalR3，实验中运用RT-PCR方法来检测GAL及其三种受体mRNA的表达。再用免疫荧光化学的方法来检测GAL蛋白的表达。第三部分，为了初步了解GAL对神经干细胞，PC12细胞，B104细胞的影响，首先，实验中运用MTT法来检测不同浓度的GAL及其受体激动剂（GAL1-11和GAL2-11）和拮抗剂（M35）对三种细胞增殖的影响。第四部分，采用TUNEL法进一步检测GAL是否引起了神经干细胞的凋亡。通过乳酸脱氢酶检测，看GAL是否引起神经干细胞凋亡。实验结果：1)经过上述分离与纯化细胞的方法，我们成功地获得能够稳定的生长，具有神经干细胞特征，并具有多分化潜能的细胞。获得了稳定的PC12和B104细胞系。2)神经干细胞不仅有GAL的表达还有所有三种GAL受体的表达；PC12细胞表达所有三种GAL受体，而不表达GAL；B104细胞表达GAL及两种受体GalR2和GalR3，而不表达GalR1。3) GAL及其激动剂可抑制体外培养的神经干细胞和PC12细胞的增殖，却对B104细胞的增殖起到促进作用。非特异性受体阻断剂M35单独作用不影响细胞的增殖，却能阻断GAL及其激动剂的作用。4) GAL并非通过诱导细胞凋亡而对神经干细胞的增殖起到抑制作用。GAL并没有引发细胞坏死等毒性作用。所以推测GAL是通过延缓细胞增殖周期而对神经干细胞的增殖产生抑制作用。综上所述，我们从E14 SD大鼠胚胎的前脑室下带（SVZ）分离纯化得到了纯度较高的神经干细胞。利用这种细胞来研究GAL的作用，结果说明GAL抑制这种细胞的增殖，但这种抑制效应不是通过引起细胞的凋亡或死亡而实现的。所以推测GAL是通过延缓细胞增殖周期而对神经干细胞的增殖产生抑制作用。此外，PC12细胞和B104细胞中由于受体表达不同，介导的GAL的效应也不同。说明三种不同的GalRs可能介导不同的作用。
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- [1].热带醋酸杆菌B104发酵条件的优化研究[J]. 中国酿造 2015(05)