HSP65-HBV多表位融合蛋白乙肝治疗性疫苗的研制

论文摘要

对于乙型肝炎,目前尚无理想的治疗药物。因此,新型的HBV治疗性疫苗的研制成为国内外的热点研究课题。新近的研究表明,HSP65可引导与其形成复合物或融合蛋白的抗原肽在树突状细胞内经MHC I类途径加工递呈,从而激活抗原特异性的细胞免疫反应。此外,PADRE是一种Th表位,Th细胞在特异性CTL的产生和维持方面起重要作用。因此,本文自行设计了一种乙肝治疗性疫苗:卡介苗热休克蛋白65-PADRE-HBV多表位融合蛋白（HSP65-HBV epi）。该融合蛋白可在小鼠体内诱生HBV特异性CTLs,刺激代表Th1途径的IgG2a抗体的产生;可在体外刺激人DCs的成熟,并可通过DCs促进自体CD8+ T细胞的增生并诱导HBV特异性CTLs的产生,这些特异性CTLs具有分泌IFN-γ的能力。因此,HSP65-HBV epi融合蛋白非常有希望成为有效的乙肝治疗性疫苗。

论文目录

• 英文缩写词表
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1.H BV 感染研究综述
• 1.1 HBV 病毒
• 1.2 HBV 基因型
• 1.3 HBV 感染的自然发展史
• 1.4 HBV 感染时各种免疫细胞的作用
• 1.5 慢性HBV 感染时CTL 反应低下的原因
• 1.6 体内清除HBV 的机制
• 1.7 乙型肝炎的治疗
• 2. 热休克蛋白在乙型肝炎免疫治疗中的应用
• 2.1 HSP 作为抗原肽的载体,可使其进入MHCI 类抗原提呈途径,激活特异性CTL
• 2.2 HSP-肽或融合蛋白对特异性CTL 的激活机理
• 2.3 HSP-多肽复合物或融合蛋白临床研究进展
• 2.4 HSP 潜在的致病性
• 第二章 材料与方法
• 1. 实验材料
• 1.1 试剂
• 1.2 质粒与菌株
• 1.3 实验动物和细胞株
• 1.4 引物由上海生物工程公司合成
• 2. 主要方法
• 2.1 基因克隆
• 2.2 融合蛋白的表达、纯化及免疫印迹鉴定
• 2.3 HSP-HBV epi 的小鼠实验
• 2.4 HSP-HBV epi 的人体外实验
• 第三章 实验结果
• 1. 基因克隆、基因表达及蛋白质纯化
• 1.1 PADRE-HBV 多表位基因（HBV epi）的PCR 合成
• 1.2 HBV epi 基因的TA 克隆及酶切鉴定
• 1.3 获得HSP65-HBV epi 重组蛋白
• 1.4 获得融合蛋白Chap10-HBV epi 重组蛋白
• 2.H SP65-HBV epi 重组蛋白的小鼠功能实验
• 2.1 HSP65-HBV epi 重组蛋白可促进小鼠脾细胞的增值
• 2.2 HSP65-HBV epi 免疫小鼠血清中特异性抗体（IgG和IgG2a）的检测
• 2.3 HSP65-HBV epi 诱导的小鼠特异性CTL 的细胞毒测定
• 3.H SP65-HBV epi 对人免疫细胞的作用
• 3.1 HSP65-HBV epi 对人PBMC 的激活作用
• 3.2 HSP65-HBV epi 的 NK 细胞毒活性检测结果
• 3.3 HSP65-HBV epi 对人DCs 的功能及成熟程度的作用
• 3.4 HSP65-HBV epi 装载的DC 对特异性CTLs 的诱生作用
• 第四章 讨论
• 1.HBV 治疗性疫苗的商业市场
• 2.DC 的成熟、及时有效的CTL是机体清除HBV的关键因素
• 3. 通过HSP65将HBV抗原引入MHCI 途径,打破机体的免疫耐受!
• 3.1 表位的选取
• 3.2 热休克蛋白与DC 在抗乙型肝炎免疫中的作用
• 3.3 HSP65-HBV epi 诱生HBV 特异性CTL 及其检测方法
• 3.3.1 检测特异性CTL 杀伤活性
• 3.3.2 检测特异性CTL 分泌IFN-γ的能力
• 3.3.3 表位肽特异性CTL 的频数的检测
• 4. 乙型肝炎的免疫治疗中还应注意的其它方面
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士学位期间已或待发表文章
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 致谢
• 个人简历