论文摘要
胃癌和结直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤。据国际癌症研究署2005年报道，胃癌和结直肠癌分别是是全球第四和第三常见恶性肿瘤，第二和第四致死性恶性肿瘤。尽管在过去的几十年胃肠道恶性肿瘤的发病率和死亡率在西方国家已经逐步下降，但在发展中国家比率仍然很高。在中国，胃癌和结直肠癌分列于五大死于癌症的原因第三和第五位。胃肠道肿瘤是基因环境相互作用，复杂的，多因素多步骤的结果。已有文献证实胃肠道肿瘤发病风险和多种基因的多态性相关，这些基因涉及炎症反应，DNA修复，代谢酶和氧化损伤。氧化应激已经被证实参与多种疾病的发生。活性氧簇通过氧化碱基，脱碱基，断链在癌变的发生及发展中起重要作用。氧化应激可应用于治疗。通过这种作用机制的抗肿瘤药在将来有很好的应用前景。抗氧化剂在肿瘤治疗中已经被证实是安全有效的。肿瘤治疗中抗氧化剂的加入能有效提高患者的生存率。髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）是一个氧化应激相关酶，它是位于多形核白细胞和单核细胞中的一种溶酶体血红素蛋白。它能催化产生次氯酸（hypochloric acid，HOCl），HOCl能引起宿主DNA损伤和致癌基因，抑癌基因的突变。同时，MPO还是一个Ⅰ相代谢酶，能代谢烟草中的前致癌原苯并（α）芘【benzo[α]pyrene，B（α）P】，产生高致癌活性的产物二羟环氧苯并芘【benzo（α）pyrenediol-epoxide，BPDE】。BPDE能够使DNA形成加合物导致姐妹染色体交换。MPO基因启动子区域-463的位置存在GA多态性。已有报道相比于野生型G等位基因，变异A等位基因的转录活性显著下降。这和A等位基因存在时Alu激素反应元件（hormone responseelement，HRE）上一个SP-1结合位点的丧失有关。一些流行病学研究已经在多种恶性肿瘤中观察了MPO G-463A多态性的作用。大量研究显示MPO-463 A等位基因能降低患肺癌的风险。A等位基因的保护作用在乳腺癌，膀胱癌，食道癌，肝毒细胞瘤和喉癌中也被观察到。然而，就我们所知，目前并没有研究关注MPO G-463A多态性和胃肠道肿瘤遗传易感性的关系。本病例对照研究，采用单因素和多因素的分析方法研究了此多态性和胃肠道肿瘤风险的关系，并观察了MPO-463 GA基因型和性别，年龄的相互作用。第一部分：MPO G-463A基因多态性与胃癌遗传易感性研究胃癌的癌前病变，继发于幽门螺旋杆菌感染的萎缩性胃炎，有过度的中性粒细胞侵润，中性粒细胞释放MPO蛋白到细胞外基质，放大了过氧化氢的氧化能力，诱导胃粘膜的损伤。以往研究显示，在MPO GG型，中性粒细胞侵润水平和幽门螺旋杆菌诱导的萎缩性胃炎有很强的相关性，但在GA基因型却没有。幽门螺旋杆菌的水提取物能激活中性粒细胞，增加MPO的分泌。另外，胃癌病人中性粒细胞的MPO水平比正常人要高。在本研究中，我们以PCR-RFLP方法检测MPO G-463A在胃癌病人中的发生率。1 MPO-463G／A基因型在胃癌病例组和对照组的分布及风险估计野生型纯合子GG基因型在病例与对照组中的频率分别为75.6％和62.6％，杂合子GA基因型的频率分别为23.6％和32.4％，而变异基因型纯合子AA的频率为0.8％和5.0％。对照组基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡（x2=0.14，P=0.71），表明没有遗传漂移或对MPO的特定等位基因没有选择优势。两组之间基因型的分布存在显著性差异（x2=7.42，P=0.03）。与对照组相比病例组A等位基因频率较低（病例：12.6％，对照21.2％）。病例组只有一个AA基因型。在所有研究对象中，相对于GG携带者，变异基因型粗OR值（GA+AA）为0.54（95％CI=0.32-0.92）。在基因型为AA的人，胃癌风险下降更多（粗OR值为0.14，95％CI=0.02-1.05），但缺乏统计学意义。经年龄，性别，吸烟状态，高血压，糖尿病和居住地校正过后，AA基因型和变异基因型（GA+AA）OR值分别为0.15（95％CI=0.02-1.24）和0.56（95％CI=0.32-0.97）。2 MPO-463G／A基因型与胃癌遗传易感性关系的分层分析按对照组年龄中位数（58岁），性别，吸烟状态和居住地分层分析结果显示：在年龄的分层分析中，变异基因型和胃癌风险下降的相关性在年轻研究对象（年龄小于58岁）更明显（校正OR=0.42，95％CI=0.18-0.94）。但在年老者这个相关性不具有统计学意义（P=0.39）；在女性中，变异基因型的校正OR值为0.68（95％CI=0.24-1.94），而在男性为0.51（95％CI=0.26-0.98）；我们在吸烟者（校正OR=0.50，95％CI=0.12-2.05）和非吸烟者（校正OR=0.59，95％CI=0.33-1.08）中都没有发现有统计学意义的相关性。居住在农村或郊区的研究对象，变异基因型和胃癌风险下降约60％相关（校正OR=0.41，95％CI=0.18-0.95），但在城市居民该相关性不具统计学意义（P=0.46）。后续的按肿瘤分化进行的分层分析表明MPO基因型和肿瘤分化没有相关性。第二部分：MPO G-463A基因多态性与结直肠癌遗传易感性研究慢性肠道炎症是结直肠癌发病的一个已知风险因素，氧化应激在慢性炎症恶性化改变中起重要作用。结直肠癌病人全血中氧化应激的产物高于年龄性别配对的对照。MPO是炎症部位脂质过氧化起始的主要的酶。它在结直肠癌组织中的活性明显高于正常组织。鉴于MPOG-463A多态性和MPO表达的关系，我们推测MPO G-463A基因多态性与结直肠癌风险存在相关性。本研究我们以PCR-RFLP方法探讨MPO G-463A与结直肠癌遗传易感性的关系。1 MPO-463G／A基因型在结直肠癌病例组和对照组的分布及风险估计野生型纯合子GG基因型在病例与对照组中的频率分别为79.5％和66.7％，杂合子GA基因型的频率分别为19.7％和29.5％，而变异基因型纯合子AA的频率为0.8％和3.8％。对照组基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡（x2=0.07，P=0.79）。两组之间基因型的分布存在显著性差异（x2=6.76，P=0.034）。本实验中病例组A等位基因的频率为10.6％，对照为18.6％。变异基因型（GG+GA）携带者与野生基因型GG携带者相比，其结直肠癌发病风险下降了49％（粗OR=0.51，95％CI=0.29-0.90）。经年龄，性别，吸烟状态，高血压，糖尿病和居住地校正过后，变异基因型（GA+AA） OR值变化不大（校正OR=0.52，95％CI=0.29-0.90）。2 MPO-463G／A基因型与结直肠癌遗传易感性关系的分层分析本实验仍然按对照组年龄中位数（60岁），性别，吸烟状态和居住地分层分析。变异基因型和结直肠癌风险下降的相关性在年轻个体（年龄小于60岁）中有统计学意义（校正OR=0.44，95％CI=0.20-0.99）。在年老个体中这个相关性不具有统计学意义（P=0.22）；在女性中，A等位基因的保护作用没有意义（P=0.34），而在男性OR值为0.41（95％CI=0.19-0.87）；在非吸烟者，变异基因型降低结直肠癌风险50％（校正OR=0.50，95％CI=0.27-0.92）。而在吸烟者没有观察到有意义的相关性；按居住地分层分析的结果没有产生有统计学意义的结果。进一步的研究表明，MPO G-463A多态性和直肠癌的发病风险有相关性（校正OR=0.43，95％CI=0.20-0.89）。但在结肠癌中，MPO-463A等位基因没有明显的保护作用（P=0.20）。将病例组病人按改良Duke’s分期法分为早期（A-B）和晚期（C-D）。MPO-463G／A基因型在早期和晚期病人中的分布没有统计学差异（P=0.95）。结论1．胃癌组和对照组的MPO-463基因型分布有显著性差异。相对于GG携带者，基因型为GA或AA的人胃癌风险下降了44％。2．A等位基因的胃癌风险保护作用在男性或年轻者有意义。在居住于农村的对象，A的保护作用也有意义。3．MPO-463基因型的分布在结直肠癌和对照有显著性差异。携带变异基因型GA或AA的人结直肠癌风险下降。4．A等位基因的结直肠癌保护作用在男性，年轻者或非吸烟者中有统计学意义。5．变异基因型和直肠癌风险下降有关，但和结肠癌的风险下降没有统计学意义。肿瘤的病理特征和MPD基因型没有相关性。