论文摘要
目的慢性淋巴细胞性甲状腺炎（桥本甲状腺炎,Hashimoto’s thyroditis, HT）属器官特异性自身免疫性疾病,Th1细胞活性增强是其发病的关键环节。活性维生素D3（1, 25（OH）2D3）可在多个环节抑制Th1细胞及其细胞因子活性。本研究拟建立Wistar大鼠实验性自身免疫性甲状腺炎（EAT）动物模型,在不同阶段给予1, 25（OH）2D3干预,观察其对大鼠EAT的干预效果,为活性维生素D3在HT的临床治疗中提供理论依据。方法:1.建立大鼠EAT模型:6-8周龄清洁级雌性Wistar大鼠分为模型组与正常组,采用猪甲状腺球白（pTG）+福氏佐剂（FA）从第0周开始每周一次皮下注射致敏原100ug/只,直至第8周处死,模型组大鼠给予0.05%碘化钾（KI）水不限量饮用,正常组大鼠仅皮下注射FA和普通水饮用。模型组大鼠每2周作心脏穿刺取血,用放射免疫法（RIA）作TG-Ab和TM-Ab水平监测。大鼠第8周处死取标本,观察其甲状腺组织形态改变,酶联免疫放射法（ELISA）检测血清IL-4, IFN-γ, IL-10及IL-12水平的变化。2. 1, 25（OH）2D3对EAT大鼠的干预:Wistar大鼠随机分为8组,其中包括1, 25（OH）2D3预防组A1, A2组,1, 25（OH）2D3治疗组B1、B2组,阳性对照组C1, C2和阴性对照D1, D2组。除阴性对照组外,其余大鼠均给予pTG+FA+KI免疫致敏。1, 25（OH）2D3预防和治疗组每只大鼠使用维生素D3 5ug/kg.2d,分别从建模06周和28周按不同用药方法（口服/腹腔注射）进行干预,正常和模型组应用消毒花生油用口服及注射作对照。各组大鼠在第6周或第8周处死,取甲状腺组织做病理学检查,分离血清,RIA检测TGAb和TMAb水平,ELISA检测细胞因子IL-4, IFN-γ, IL-10及IL-12的变化。结果:1. EAT模型建立:从组织形态学上观察,与正常对照大鼠相比,EAT模型组大鼠甲状腺结构不完整,滤泡破坏、萎缩或消失,胶质稀少,淋巴细胞弥漫性浸润,部分位置有纤维化改变。模型组从第2周起TG-Ab和TM-Ab浓度开始上升,2、4、6、8周抗体水平分别与0周相比较,水平有显著性升高（P<0.01）,28周间抗体水平无统计学差异（P>0.05）。2. EAT大鼠体内细胞因子水平变化:IFN-γ、IL-12水平显著高于正常对照大鼠,有统计学差异性（P<0.05）。EAT大鼠血清IL-4、IL-10水平与正常对照组大鼠相比显著性降低（P<0.01）。3. 1,25（OH）2D3对大鼠EAT的预防效应:与对照组相比,预防组大鼠甲状腺结构保持较完整,少量滤泡有萎缩,淋巴细胞浸润不明显。血清TG-Ab和TM-Ab水平与同时期的阳性对照相比,预防组大鼠TG-Ab和TM-Ab水平明显降低（P<0.05）,与阴性对照无统计学差异（P>0.05）;预防组大鼠较阳性对照组IFN-γ及IL-12水平显著下降（P均<0.01）,IL-4和IL-10水平升高,有显著性意义（P<0.001）,与阴性对照组相比,无显著性差异。口服组与注射组间组织形态、抗体水平、因子浓度均无显著性差异（P>0.05）4. 1, 25（OH）2D3对大鼠EAT的治疗效应:与对照组相比,治疗组EAT大鼠甲状腺整体结构完整,大部分滤泡形态正常,淋巴细胞浸润减少。血清TGAb和TMAb水平与同时期的阳性对照相比,治疗组大鼠抗体水平明显降低（P<0.05）,但较阴性对照明显升高（P<0.05）。从细胞因子来看,与阳性对照组相比较,治疗组IFN-γ及IL-12水平显著下降（P <0.01和P<0.05）,IL-4和IL-10水平升高,有显著性意义（P<0.001）。与正常组比较,均无统计学意义（P>0.05）。口服组与注射组间组织形态、抗体水平、因子浓度均无显著性差异（P>0.05）。结论:1.利用Wistar大鼠建立EAT模型是模拟人类自身免疫性甲状腺炎的较理想动物模型,应用pTG+CFA皮下注射、加碘剂服用的方法建模,操作方便,结果较可靠;2. EAT大鼠体内存在有Th1/Th2失衡,表现TH1型细胞及因子功能亢进,与人类HT免疫失衡相一致;3.在EAT大鼠建模开始就使用1,25（OH）2D3可使EAT大鼠甲状腺组织保持较完整形态,维持血清抗体及细胞因子IFN-γ,IL-4,IL-12及IL-10水平在正常范围。提示1, 25（OH）2D3可能阻止大鼠甲状腺炎的发生或减轻发病程度。4.大鼠EAT发病后再使用1, 25-（OH）2D3可改善甲状腺组织内淋巴细胞浸润及滤泡破坏等病理改变,使升高的IFN-γ,IL-12水平下调,上调IL-4, IL-10水平。提示有可能阻止EAT大鼠炎症的程度,并阻止其进展。5.1, 25-（OH）2D3采取注射及口服给药方式对EAT疾病指标及因子水平的影响程度相似,无显著差异性。
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标签：活性维生素论文; 实验性自身免疫甲状腺炎论文; 细胞论文; 细胞因子论文;