论文摘要
目的研究不同浓度转化生长因子β-1（TGF-β1）以及TGF-β1作用后的星形胶质细胞条件培养液对体外培养的胎鼠小脑神经元树突生长及突触素1（Synapsin1）表达的影响，探讨脑损伤后促进神经功能恢复的机制及TGF-β1作用下星形胶质细胞条件培养液对神经元生长的调节作用。方法（1）取孕18天小鼠神经元细胞进行体外原代培养，在培养7d的小脑神经元中加入不同浓度的TGF-β1（1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml），并设正常对照组。作用48小时后，对培养的神经元细胞采用免疫细胞化学荧光标记：用结构性微管相关蛋白-2（microtubule associated protein-2, MAP2）标记树突，同时以突触素1（Synapsin1）抗体标记Synapsin1。用荧光显微镜直接观察细胞树突的长度变化；应用多功能酶标仪测量Synapsin1的荧光强度值。（2）取出生3d内的新生鼠，纯化培养小鼠星形胶质细胞，传代接种后采用SiRNA基因沉默技术，干扰Smad3基因的表达，RT-PCR验证沉默效果，将实验分5组，分别加入浓度为10ng·ml-1的TGF-β1以及Smad3-SiRNA-1，Smad3-SiRNA-2及Smad3-SiRNA-3，并设空白对照，培养2d后，制成星形胶质细胞条件培养液，-20℃冻存。把经过处理后的星形胶质细胞条件培养液加入到体外培养的原代神经元细胞作用48小时后，对培养的神经元细胞采用免疫细胞化学荧光标记：用结构性微管相关蛋白-2（microtubule associated protein-2, MAP2）标记树突，同时以突触素1（Synapsin1）抗体标记Synapsin1。用荧光显微镜直接观察细胞树突的长度变化；应用多功能酶标仪测量Synapsin1的荧光强度值。结果（1）在1ng/ml、5ng/ml及10ng/ml TGF-β1干预培养48h后，小脑神经元树突长度分别为106.2±5.5、164.3±7.49、218.3±13.5，与对照组（63.7±7.8）相比，明显增长（P <0.05）；TGF-β1也可促进Synapsin1的表达，在1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml TGF-β1干预培养的条件下，Synapsin1荧光强度值分别为21940.7±870.0、38450.0±559.1、46067.5±1303.5，较对照组（17608.3±1389.3）显著增强（P <0.01）。（2）TGF-β1作用后的星形胶质细胞培养液干预培养48小时后，TGF-β1作用的星形胶质细胞培养液干预培养48小时后，神经元树突长度为（66.75±5.94），与对照组（81.26±7.69）相比，明显减低，显示有统计学差异（P <0.05）。对突触素1表达的影响显示10ng/mlTGF-β1组（14992.73±1537.73），与对照组（17891.20±1034.44）相比，表达明显减弱，显示有统计学差异（P <0.05）。成功沉默Smad3基因后，Smad3-SiRNA-1组、Smad3-SiRNA-3组突起长度的测量平均值分别为：107.82±11.48、105.28±13.18，对照组81.26±7.69相比，明显增长，显示有统计学差异（P <0.05）。其对Synapsin1的荧光强度值的影响，Smad3-SiRNA-1组、Smad3-SiRNA-3组Synapsin1的荧光强度值分别为：27008.86±1720.05、28325.67±1547.93，与对照组（17891.20±1034.4）相比，表达明显增强。显示统计学意义（P<0.05）。结论（1）TGF-β1可通过促进小脑神经元树突生长以及Synapsin1表达的增多，促进神经功能的恢复；其促进效应总体趋势呈剂量依赖性特征。（2）TGF-β1作用的胶质细胞培养液抑制小脑神经元树突生长以及减少Synapsin1的表达。TGF-β1-Smad3信号转导系统参与此过程。
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标签：星形胶质细胞条件培养液论文; 转化生长因子论文; 干扰论文; 树突论文; 突触素论文;