应用定量蛋白质组学方法筛选肺鳞癌转移相关蛋白

论文摘要

目的应用激光捕获显微切割（laser capture microdissection,LCM）和荧光差异显示凝胶电泳（differential in-gel electrophoresis,DIGE）技术建立有转移与无转移的人肺鳞癌组织的双向凝胶电泳图谱,筛选并鉴定出有转移和无转移的肺鳞癌组织间差异表达的蛋白质,DeCyder 2D图像分析软件识别差异蛋白质点,质谱鉴定差异表达蛋白质,为研究肺鳞癌转移机制、筛选肺鳞癌转移相关标志物奠定基础。方法收集术后新鲜肺鳞癌标本,根据病理诊断和临床检查将标本分为2组:有转移的肺鳞癌组（16例）和无转移的肺鳞癌组（12例）。用激光捕获显微切割方法纯化癌细胞,提取细胞总蛋白,采用DIGE技术得到Cy2、Cy3及Cy5荧光素标记的有转移和无转移的肺鳞癌组织凝胶图谱。采用DeCyder 2D图像分析软件进行分析,识别两组间差异表达的蛋白质点。选取差异蛋白质点,胶内酶解后行肽质量指纹分析及网上数据库查询,鉴定差异蛋白质。然后采用Western-Blot和免疫组化验证,膜联蛋白Ⅱ（AnnexinⅡ）和组织蛋白酶D（Cathepsin D）在两组肺鳞癌组织中的表达水平。结果建立了LCM纯化的有转移与无转移的肺鳞癌组织荧光差异显示凝胶电泳图谱,共识别了24个差异表达蛋白质点,质谱鉴定了14个蛋白质。其中10个蛋白质在有转移的肺鳞癌组织中表达上调,4个蛋白质在有转移肺鳞癌组织中表达下调。蛋白质AnnexinⅡ,Cathepsin D经Western blot和免疫组化检测,在有转移的肺鳞癌组织中表达均高于无转移肺鳞癌组织,与比较蛋白质组学研究结果一致。结论本实验首次应用LCM结合DIGE技术成功建立了有转移和无转移的肺鳞癌组织间荧光差异表达双向凝胶图谱,鉴定了14个肺鳞癌转移相关蛋白质,并对其中2个差异表达蛋白质进行了验证。这些蛋白质可能在肺鳞癌转移中起到促进或者抑制的作用,为研究肺鳞癌转移机制、筛选肺鳞癌转移相关标志物奠定基础。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩写词简表
• 前言
• 技术路线
• 材料与方法
• 1 材料
• 2 方法
• 结果
• 1 肺鳞癌细胞LCM纯化
• 2 蛋白浓度测定
• 3 荧光差异双向凝胶电泳蛋白表达图谱
• 4 差异蛋白质的质谱分析
• 5 部分差异蛋白质蛋白质在肺鳞癌组织中的表达
• 讨论
• 1 LCM在肿瘤蛋白质组学研究中的优势
• 2 DIGE方法筛选肺鳞癌转移相关蛋白质
• 3 部分差异蛋白质在肺癌转移过程中的作用机制
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文