镧抑制脂多糖诱导小鼠巨噬细胞产生一氧化氮的机制

论文摘要

目的和意义:一氧化氮（nitric oxide,NO）是炎症反应过程中的重要介质和调节因子,它虽可杀灭侵入机体的病原微生物,维持机体正常的免疫防御功能,但过量NO也对宿主细胞产生损伤作用。体内NO生成的唯一途径是由一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）催化L-精氨酸合成。研究证明,脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）等刺激因子能诱导单核巨噬细胞高表达iNOS,从而合成过量NO,引起一系列严重病理反应,如感染性休克和多器官功能衰竭（multiple organ failure,MOF）等。因此抑制iNOS的过量表达以控制NO的产生,对临床相关疾病的治疗具有重要意义。镧是一种具有多种生物学活性的稀土元素,我们的前期研究已证实镧具有结合LPS抑制LPS生物学效应的作用,本研究进一步探讨镧对LPS诱导的小鼠巨噬细胞产生NO的影响,同时观察镧对iNOS基因转录的重要调控因子-核转录因子-κB （nuclear factor-kappaB,NF-κB）活化的可能影响,以探讨镧影响iNOS表达的可能机制,为研究NO拮抗剂及开发稀土的药用价值提供实验依据。研究内容和方法:1.通过MTT法观察不同浓度氯化镧（Lanthanum chloride ,LaCl3）（2.5μmol/L～40μmol/L）对小鼠巨噬细胞生长活性的影响。2.采用免疫荧光细胞化学染色、Western Blotting及RT-PCR方法观察LaCl3对LPS诱导的小鼠巨噬细胞iNOS蛋白及基因表达的影响,同时观察NO产物的变化。3.采用免疫荧光细胞化学染色及Western Blotting方法观察LaCl3对LPS活化小鼠巨噬细胞NF-κB的影响。结果:1.一定浓度的LaCl3（2.5～40μmol/L）对小鼠巨噬细胞的生长活性无明显影响。2.免疫荧光细胞化学染色及Western Blotting结果显示低浓度的LaCl3（2.5μmol/L）能显著抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞iNOS的蛋白表达,而对正常培养的小鼠巨噬细胞iNOS蛋白表达无明显影响。3. RT-PCR结果显示LaCl3能显著抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞iNOSmRNA的表达,而对正常培养的小鼠巨噬细胞iNOSmRNA表达无明显影响。4. NO含量测定结果显示LaCl3能显著抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO。5. NF-κB /p65活化状况检测结果显示,LaCl3能显著抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞NF-κB /p65核转位,而对正常培养的小鼠巨噬细胞NF-κB /p65活性无明显影响。结论:1.LaCl3能显著抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞iNOS基因及蛋白的表达,从而显著降低NO的分泌水平。2.LaCl3可能通过抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞NF-κB /p65的活化,从而抑制iNOS的表达及NO的产生。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 第二章 材料与方法
• 第三章 结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录A
• 附录B
• 附录C
• 攻读学位期间的研究成果