紫杉醇脂质复合体对大鼠肝移植后血管病变的抑制作用

论文摘要

目的:免疫反应是导致移植物血管病变（allograft vasculopathy AV）的核心因素,急性排斥反应所致移植物血管损伤常常是细胞免疫和体液免疫共同致病的结果,其作用机理相当复杂,治疗比较棘手。此项研究在于通过纳米生物技术探讨紫杉醇脂质复合体在大鼠肝移植动物模型中治疗急性排斥反应所致移植肝血管损伤的价值。方法:本研究内容分为二大部分:第一部分为紫杉醇脂质复合体的制备,并对紫杉醇脂质复合体药代动力学及生物安全性进行检测。第二部分通过建立大鼠肝移植模型,利用酶联免疫吸附试验（ELISA）,分三组（紫杉醇脂质复合体组、紫杉醇组和环孢素组）检测大鼠肝移植术后2周血清血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-2（IL-2）含量及大鼠移植肝脏组织标本中细胞周期素依赖性激酶2（CDK2）和细胞周期素蛋白E（Cyclin E）的表达,利用末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测血管平滑肌细胞（VSMC）的凋亡率,探讨紫杉醇纳米脂质体抑制大鼠肝移植急性排斥反应所致血管损伤的机制。对紫杉醇脂质复合体在抑制急性排异所致移植肝血管病变方面作出评价。结果:紫杉醇脂质复合体的平均粒径为115.1nm,包封率为65.3%。具有明显的肝靶向性、良好的细胞和组织相容性。紫杉醇脂质复合体能显著降低肝血管平滑肌细胞（VSMC）中血管细胞周期素依赖性激酶2（CDK2）和细胞周期素蛋白E（Cyclin E）的表达,使血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡明显增加,抑制VSMC增殖;并能减少大鼠肝移植后免疫反应过程中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-2（IL-2）、血管内皮生长因子（VEGF）的产生,其效果明显优于注射纯紫杉醇和环孢素组。结论:紫杉醇脂质复合体具有明显的肝靶向性,能减轻大鼠肝移植后急性排斥反应所致血管的损伤,紫杉醇脂质复合体作为一种新型辅助免疫抑制剂在减轻大鼠肝移植后急性血管损害、减轻免疫排斥反应方面有潜在应用价值。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英汉缩略词表
• 第一部分 紫杉醇脂质复合体的制备及其生物学效应
• 前言
• 第一章 紫杉醇脂质复合体的制备
• 1.材料与方法
• 1.1 主要实验试剂、仪器
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 标准贮备液的配制
• 1.2.2 紫杉醇脂质复合体的制备
• 1.2.3 检测波长的确定
• 1.2.4 加样回收率试验
• 1.2.5 洗脱曲线的绘制
• 1.2.6 紫杉醇纳米脂质体的包封率
• 1.2.7 脂质体粒径和粒度分布的测定
• 1.2.8 脂质体的体外释放
• 2 结果
• 2.1 检测波长的确定
• 2.2 加样回收率试验
• 2.3 洗脱曲线的绘制
• 2.4 脂质体粒径和粒度分布
• 2.5 包封率
• 2.6 紫杉醇脂质体的体外释放
• 3.讨论
• 4.结论
• 第二章 紫杉醇脂质复合体的生物学效应
• 1.材料与方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要实验试剂和设备
• 1.3 实验方法
• 2.结果
• 2.1 直线相关性与回归方程
• 2.3 肝组织的紫杉醇经时曲线
• 2.4 各组织药物浓度-时间的AUC值
• 2.5 各组织中紫杉醇峰浓度值
• 2.6 药物靶向效率
• 3.讨论
• 4.结论
• 参考文献
• 第二部分 紫杉醇脂质复合体对大鼠肝移植血管病变的抑制作用
• 前言
• 第一章 同种异体大鼠肝移植动物模型的制备
• 1.材料和方法
• 1.1 材料和仪器
• 1.2 方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 第二章 紫杉醇脂质复合体对肝移植血管病变的抑制作用
• 1.资料和方法
• 1.1 材料和仪器
• 1.2 实脸分组
• 1.3 标本采集
• 1.4 主要观察指标
• 1.5 统计学处理
• 2.结果
• 2.1 组织病理学改变
• 2.2 免疫组化检测
• 2.3 血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡率
• 2.4 大鼠血清中TNF-a、IL-2、VEGF的测定
• 3.讨论
• 4.结论
• 参考文献
• 综述一
• 综述二
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果目录