论文摘要
目的：本课题旨在提取筋骨草中化学成分，通过抗炎实验筛选出有效部分；观察不同剂量筋骨草有效部分抗炎抑菌及抗博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化作用，并探讨其抗肺纤维化作用机制；通过对筋骨草有效部分急性毒性研究，对其安全性作出初步的评价。方法：①筋骨草化学成分提取采用大孔吸附树脂，先用蒸馏水洗脱筋骨草水煎液得到筋骨草水洗液，再用乙醇梯度洗脱得到筋骨草醇洗液。采用试管法和薄层法，通过多种指示剂和显色剂的沉淀或颜色反应进行成分定性试验，初步推断筋骨草各部分提取液中可能含有的化学成分。②筋骨草有效部分筛选用二甲苯致小鼠耳廓肿胀急性炎症模型和琼脂皮下注射形成肉芽肿慢性炎症模型进行筛选。各用50只雄性健康小鼠随机分为5组，每组10只：正常对照生理盐水组（20ml／kg／d）、醋酸泼尼松阳性对照组（30mg／kg／d）、筋骨草水煎液组（6g／kg／d）、筋骨草水洗液组（6g／kg／d）、筋骨草醇洗液组（6g／kg／d），急性抗炎实验ig给药，每日1次，连续3天，慢性抗炎实验ig给药，每日1次，连续14天，比较小鼠耳廓肿胀度和肉芽肿质量，初步明确筋骨草有效部分。③筋骨草有效部分抗炎抑菌作用及量效观察急性炎症模型采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法，慢性炎症模型采用琼脂皮下注射形成肉芽肿法，各选50只雄性健康小鼠，分别随机分为5组，每组10只：正常生理盐水对照组（20ml／kg／d）、泼尼松阳性对照组（30mg／kg／d）、筋骨草醇洗液低剂量组（3g／kg／d）、筋骨草醇洗液中剂量组（6g／kg／d）、筋骨草醇洗液高剂量组（12g／kg／d），急性抗炎实验ig给药，每日1次，连续3天，慢性抗炎实验ig给药，每日1次，连续14天，比较小鼠耳廓肿胀度和肉芽肿质量，观察不同剂量筋骨草有效部分的量效关系；体外抑菌实验采用平皿打孔法测定抗菌活性以及试管二倍稀释法检测最低抑菌浓度（MIC）。④筋骨草有效部分抗肺纤维化实验选72只雄性健康小鼠随机分为6组，每组12只：对照组（假手术组）、肺纤维化模型对照组、醋酸泼尼松组、筋骨草醇洗液高、中、低三个剂量组（12、6、3g／kg／d）。用麻醉小鼠气管内注入博莱霉素的方法，复制小鼠肺纤维化模型，于造模当天开始每日给药，分别于给药后第7、28d处死，取肺组织行HE染色，采用病理组织学结合图像分析方法评价小鼠肺组织肺泡炎和纤维化程度，同时用免疫组化法观察肺组织转化生长因子-β（TGF-β）的表达，ELISA测定血清白介素-4（IL-4）含量。⑤急性毒性试验通过预实验最大容量和最大浓度一次灌胃，不足以引起小鼠死亡，不能测出半数致死量(LD50)，改用一日灌胃2～3次，测定最大耐受量（MTD）。结果：①筋骨草水洗液检识糖、酚类、皂苷成分为正反应，筋骨草醇洗液检识酚类、生物碱、黄酮类、甾体、三萜类、环烯醚萜苷成分为正反应。②筋骨草醇洗液（6g／kg）对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、琼脂肉芽肿形成有极显著的抑制作用（P＜0.001），水煎液（6g／kg）有明显的的抑制作用（P＜0.05），水洗液（6g／kg）虽有所抑制作用但无统计学显著意义。③筋骨草醇洗液中剂量组（6g／kg／d）和高剂量组（12g／kg／d）对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、琼脂肉芽肿形成有极显著的抑制作用（P＜0.01），低剂量组（3g／kg／d）有明显的抑制作用（P＜0.05）；筋骨草醇洗液（2、1、0.5g／ml）对金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌均有不同程度的抗菌作用，最低抑菌浓度（MIC）分别为0.125、0.25、0.5g原生药／ml，均有明显的量效关系。④筋骨草醇洗液高、中剂量和泼尼松治疗后小鼠肺泡炎及肺纤维化较模型组显著减轻，以筋骨草醇洗液高剂量组为优。生化检测显示筋骨草醇洗液高、中剂量组TGF-β和IL-4含量显著低于模型组（P＜0.01），低剂量28d与模型组比较有显著差异（P＜0.05），且呈量效关系。⑤测得筋骨草醇洗液小鼠ig给药MTD为720g／kg·d，相当于60kg体重人日用量的1440倍，7d内小鼠全部存活，未见明显中毒症状，脏器解剖肉跟观察未见异常改变。结论：①筋骨草醇洗液中含有丰富的生物碱、黄酮、苷类、多糖、有机酸及环烯醚萜苷等成分。②筋骨草醇洗液是筋骨草抗炎活性主要有效部分。③筋骨草醇洗液高、中、低剂量均有抗炎、抑菌作用且呈明显的量效关系。④筋骨草醇洗液高、中剂量组可通过下调细胞因子TGF-β和IL-4的表达而减轻小鼠肺间质纤维化。⑤筋骨草醇洗液未见急性毒副作用，临床应用安全范围大。