论文摘要
目的:通过检测急性白血病患者和对照组儿童中CYP3A5-6986位点的基因型分布特点,探讨CYP3A5基因多态性与儿童急性白血病易感的相关性;检测急性白血病患者的CYP3A5mRNA表达水平,探讨基因表达水平对白血病患者治疗、预后评价的指导意义。方法:1、采用病例-对照研究,应用聚合酶链-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法及PCR产物序列测定,检测儿童急性白血病患者139例,其中包括急性淋巴细胞性白血病（ALL）91例,急性髓细胞性白血病（AML）48例,和120例对照组儿童的CYP3A5-6986位点基因型分布及等位基因频率。2、用实时定量RT-PCR法检测34例初诊的ALL、32例AML患儿及20例对照组儿童的骨髓单个核细胞内wt-CYP3A5和SV1-CYP3A5mRNA的表达水平及对部分病例进行跟踪随访。同时结合患儿的性别、FAB分型、染色体数量核型各项指标综和分析。结果:1、对照组和急性白血病儿童中CYP3A5-6986多态性位点存在野生型（CYP3A5*1/*1）、杂合突变型（CYP3A5*1/*3）、纯合突变型（CYP3A5*3/*3）三种基因型;对照组与ALL组、AML组的基因型及等位基因频率分布存在显著性差异。2、①66例初诊AL患者中CYP3A5*1/*1基因型15例,*1/*3基因型16例,*3/*3基因型35例。三种基因型内均能检测到野生型mRNA（wt-mRNA）,变异型mRNA（SV1-mRNA）存在于*1/*3和*3/*3基因型中。无论是CYP3A5*1/*3还是CYP3A5*3/*3基因型,wt-mRNA和SV1-mRNA均明显相关,r分别为0.790和0.847。②66例初诊AL患儿按基因型分组后对他们的mRNA表达水平进行检测,三组的wt -mRNA检测结果分别为27.78±13.25、8.4±3.23、0.8±1.73,存在显著性差异（P均<0.05）。③6 6例AL患者中有51例可进行临床疗效评估,ALL组wt-mRNA低表达者第一次化疗后的缓解率高于wt-mRNA高表达者,两者比较有显著性差异,P=0.034。④w t-CYP3A5mRNA在AML患者FAB分型中以M5型表达水平最高,M3型表达最低,P=0.044;不同性别的AL患者wt-CYP3A5mRNA表达水平无显著差别;染色体数量改变对AL患儿的wt-CYP3A5 mRNA表达水平高低没有影响。但伴有t（1;19）、t（9;22）或t（4;11）异常核型的初诊ALL患者wt-CYP3A5m RNA与高于正常核型的ALL患者。⑤对两例ALL患儿在不同时期（包括初诊、缓解期、复发前）进行CYP3A5表达水平的跟踪检测,复发前wt-CYP3A5的表达水平较前升高。结论:1、CYP3A5 6986G多态性与儿童急性白血病的易感性可能相关。2、实时定量PCR的方法证实了CYP3A5在体内白血病细胞中存在转录。3、Wt-CYP3A5mRNA表达高低与白血病患者的化疗疗效及预后密切相关。4、动态观测wt-CYP3A5mRNA表达水平变化有助于判断病情变化。