兰州百合多糖的制备、理化性质测定及生物活性初步研究

论文摘要

本文以兰州百合鳞茎为原料提取多糖,并对多糖的提取方法,纯化工艺,纯化后多糖的理化性质及增强免疫活性进行研究。采用正交实验对超声波提取多糖的工艺进行优选。实验表明,超声波提取多糖的最佳工艺条件为:提取温度70oC,料液比1:12,提取时间120min,提取2次,得率为12.85%。在相同条件下,超声波提取与传统的水煎煮提取相比,得率提高40.75%。用Savege法与Savege+木瓜蛋白酶联用法脱蛋白比较,Savege+木瓜蛋白酶法脱蛋白所需Savege脱蛋白次数少,多糖得率高（仅Savege法得率为1.84%而用Savege法脱蛋白得率约为2.31%）。对纯化后的多糖的理化性质进行测定,结果显示:兰州百合多糖为白色粉末;总糖含量93.37%;1%的多糖水溶液pH值为6.93;比浓粘度为81.698cm3/g,粘均分子质量为20093.12。热分析表明,多糖为无定型粉末;红外光谱分析表明,其含有多糖特征吸收峰。通过柱层析对多糖进行分级分离,得到两种组分:LPⅠ和LPⅡ,分别占78.3%和17.6%。利用原子力显微镜扫描主要组分LPⅠ在溶液中的形貌,结果表明:LPⅠ在低浓度下（0.5ug/ml）,形成大小不均匀的球状体;随着浓度的增大（1ug/ml）,聚集的球状体增大形成岛屿状;在溶液浓度10ug/ml时,岛屿与岛屿之间又相互连接,聚集形成一层高低不平的糖膜。采用环磷酰胺诱导小鼠免疫低下模型,对兰州百合多糖药理活性进行研究。具体:测定脾脏、胸腺重量并计算脏器系数;碳粒廓清法测定巨噬细胞吞噬功能;2, 4二硝基氟苯（DNFB）法测定迟发型超敏反应;用植物凝血素（PHA）诱导测定其淋巴细胞转化率;比色法测定其溶血素含量及急毒法评估其毒性。结果表明,兰州百合多糖可升高小鼠廓清指数、吞噬指数,增强DNFB所致耳肿胀度,增高免疫器官的重量指数,提高淋巴细胞转化率及血清溶血素含量,提示兰州百合多糖对环磷酰胺所致小鼠免疫抑制模型有较好的防治作用,可提高机体非特异性免疫,体液免疫和细胞免疫的功能。急毒实验表明,兰州百合多糖无明显毒性,是安全的。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 主要英文缩略词
• 第一章 综述
• 1 多糖与免疫调节作用
• 1.1 多糖的研究和应用
• 1.2 多糖免疫调节作用研究进展
• 1.3 多糖的作用机制
• 1.4 多糖在免疫调节上的应用
• 2 兰州百合概况
• 2.1 兰州百合形态与分布
• 2.2 兰州百合的营养价值
• 2.3 兰州百合研究进展
• 3 本实验研究目的、意义、内容及创新点
• 3.1 目的及意义
• 3.2 内容及创新点
• 第二章 兰州百合多糖的提取工艺研究
• 1 实验部分
• 1.1 实验材料
• 1.2 主要试剂及仪器
• 1.3 实验方法
• 2 实验结果与分析
• 2.1 提取纯化工艺优化
• 2.2 百合多糖的鉴别与分析
• 3 本章小结及讨论
• 第三章 兰州百合多糖的理化性质分析
• 1 实验部分
• 1.1 实验材料
• 1.2 主要试剂及仪器
• 1.3 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 总糖含量
• 2.2 兰州百合多糖的物理性质
• 2.3 兰州百合多糖水溶液pH 值
• 2.4 粘均分子量
• 2.5 热分析
• 2.6 IR 分析
• 2.7 Sephadex G-100柱层析分级
• 3 本章小结及讨论
• 第四章 兰州百合多糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响
• 1 实验部分
• 1.1 供试动物
• 1.2 实验材料
• 1.3 主要试剂及仪器
• 1.4 实验方法
• 1.5 统计学分析
• 2 结果分析
• 2.1 兰州百合多糖对小鼠网状内皮系统的碳粒廓清速度的影响
• 2.2 兰州百合多糖对小鼠迟发性超敏反应及免疫器官重量的影响
• 2.3 兰州百合多糖PHA 刺激淋巴细胞转化率的影响
• 2.4 兰州百合多糖对小鼠血清溶血素含量的影响
• 2.5 急毒实验
• 3 本章小结及讨论
• 结论与展望
• 1 结论
• 2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 附录