过氧化氢对晶状体上皮细胞增生及VEGF表达的影响

论文摘要

目的:白内障是世界主要致盲性疾病之一。研究认为紫外线和可见光能诱发晶状体产生氧自由基,是导致老年性白内障的主要因素之一。多数白内障患者前房内过氧化氢（H2O2）含量升高。H2O2可刺激晶状体上皮细胞分泌一些生长因子如结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）、晶状体上皮源性生长因子（lens epithelial derived growth factor, LEDGF）,引起细胞生物学效应的改变。但其对晶状体上皮细胞分泌血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）有无影响却未见相关研究。研究显示H2O2可刺激多种细胞分泌VEGF,从而发挥一定的生物学效应。因此,本实验的研究目的:（1）观察不同浓度的H2O2对晶状体上皮细胞增生的影响;（2）研究不同浓度H2O2对晶状体上皮细胞分泌VEGF的影响,及VEGF的分泌变化与晶状体上皮细胞在H2O2作用下的增生效应变化之间的关系。方法:（1）分组及处理:实验共分8组。体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04,在培养液中分别加入浓度为1 nM,10nM,100nM,1μM,10μM,100μM和1mM的过氢并处理40 min,对照组无过氧化氢,随后换至正常培养液中继续培养,分别于不同时间点观察各项指标的变化;（2）不同浓度的过氧化氢对人晶状体上皮细胞增生的影响:按照上述方法处理后,分别于在0、6、12和24 h用MTT方法检测晶状体上皮细胞的增生活力,在6 h用Western blot观察不同浓度过氧化氢对晶状体上皮细胞表达PCNA的影响;（3）不同浓度的过氧化氢对人晶状体上皮细胞表达VEGF的影响:按照上述方法处理后,于24 h用ELISA方法检测培养液上清中血管内皮生长因子（VEGF）的含量。结果:（1）不同浓度的过氧化氢对人晶状体上皮细胞增生的影响:MTT结果提示:在培养液中加入1 nM～10μM浓度的H2O2处理组,晶状体上皮细胞增生率（OD值）随浓度较对照组明显增加,其中以10nM最为明显;而100μM、1 mM H2O2处理组,晶状体上皮细胞出现生长抑制。用Western blot检测PCNA表达的结果显示:1 nM～10μM H2O2处理组,晶状体上皮细胞PCNA表达随浓度较对照组明显增加,其中以10nM最为明显;而100μM、1 mM H2O2处理组晶状体上皮细胞内PCNA表达明显降低;（2）不同浓度的过氧化氢对人晶状体上皮细胞表达VEGF影响:1nM - 10μM的过氧化氢刺激后,VEGF水平均高于对照组,且呈浓度依赖性,峰值出现在10nM和10μM H2O2处理组。反之,100μM、1 mM处理组,VEGF水平与对照组无显著差异,而且明显低于10nM组（P<0.05）。结论:（1）低浓度（1 nM～10μM）的H2O2可以促进晶状体上皮细胞增殖,高浓度的过氧化氢（100μM、1 mM）对细胞具有杀伤作用;（2）低浓度（1 nM～10μM）的H2O2可使VEGF分泌增加,且与刺激晶状体上皮细胞增殖的浓度一致,提示VEGF可能作为一种氧化应激产物引起晶状体上皮细胞的增生效应。创新点首次观察了过氧化氢对晶状体上皮细胞分泌VEGF的影响。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 实验一 不同浓度的血清对晶状体上皮细胞增生的影响
• 1 材料
• 1.1 实验细胞
• 1.2 主要仪器及试剂
• 1.3 主要试剂的配制、保存
• 2 方法
• 2.1 晶状体上皮细胞培养
• 2.2 MTT法检测不同浓度血清对晶状体上皮细胞生长的影响
• 2.3 统计学处理
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二 不同浓度过氧化氢对晶状体上皮细胞增生的影响
• 1 材料
• 1.1 实验细胞
• 1.2 主要试剂及仪器
• 2 方法
• 2.1 晶状体上皮细胞培养
• 2.2 MTT比色法测定不同浓度过氧化氢对晶状体上皮细胞生长的影响
• 2.3 Western Blot法测定过氧化氢对晶状体上皮细胞表达PCNA的影响
• 2.4 统计学处理
• 3 结果
• 2O₂处理后晶状体上皮细胞形态变化'>3.1 H₂O₂处理后晶状体上皮细胞形态变化
• 3.2 MTT比色法测定不同浓度过氧化氢对晶状体上皮细胞活力的影响
• 3.3 Western Blot 法测定不同浓度的过氧化氢对晶状体上皮细胞表达 PCNA 的影响
• 4. 讨论
• 实验三 不同浓度的过氧化氢对晶状体上皮细胞分泌VEGF的影响
• 1 材料
• 1.1 实验细胞
• 1.2 主要试剂及仪器
• 2 方法
• 2.1 晶状体上皮细胞培养
• 2.2 晶状体上皮细胞接种、处理与分组
• 2.3 ELISA 检测培养液上清VEGF水平
• 2.4 统计学处理
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 个人简历和研究成果
• 致谢