人参多糖作为甲型H1N1流感病毒灭活疫苗佐剂的研究

论文摘要

人类自20世纪30年代开始认识流感病毒以来,就对流感病毒的防治进行了不懈的努力,但是由于流感病毒极其容易变异,直到现在,流感病毒依然是威胁人类和动物健康的重要病原之一。全球范围内,每年季节性流感病毒流行都给社会造成巨大的经济损失,而世界性大流行一旦爆发,就有可能造成人类的大量死亡。2009年的甲型H1N1流感大爆发席卷了全球,导致世界范围内至少1.6万余人死亡。应对流感病毒最有效的措施是接种疫苗,目前所使用的流感疫苗如灭活疫苗,其免疫原性较弱,而添加佐剂能增强灭活疫苗的免疫原性,提高免疫效力并节省疫苗抗原,因此研发安全有效的流感病毒疫苗佐剂是很有意义的。人参是我国特产珍贵药材之一,早在两千多年前,人们就发现人参有宁身益智、益气生津、延年益寿等功效。人参多糖是从人参根、茎、叶等部位提取出来的多糖,研究表明人参多糖能诱导细胞因子产生、促进抗体和补体形成及增强免疫器官功能等,对机体的特异性免疫和非特异性免疫都有明显的促进作用,因此我们认为它可能有潜在的疫苗佐剂功能。在本研究中,我们选用了从人参的茎叶中提取出来的人参多糖作为流感病毒疫苗佐剂,其主要成分是由半乳糖醛酸、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖和鼠李糖等组成的酸性杂多糖。实验中取不同剂量的人参多糖,用PBS（-）溶解,分别与5ng（以HA含量计算）甲型H1N1流感病毒灭活疫苗混合均匀,以200μl体积通过腹腔注射的方法共同免疫6-8周龄雌性BALB/c小鼠。实验分组如下：8个实验组分别为添加不同剂量人参多糖（包括200μg、400μg、600μg、800μg、1200μg、1400μg、1600μg和2000μg）的甲型H1N1流感病毒灭活疫苗免疫组；对照组分为3个组,分别为添加100μg氢氧化铝佐剂的甲型H1N1流感病毒灭活疫苗免疫组,甲型H1N1流感病毒灭活疫苗单独免疫组以及不做任何处理的空白对照组。一次免疫后不同时间点通过尾部静脉采集小鼠血液,应用ELISA方法检测不同疫苗免疫的小鼠血清中早期IgM抗体的变化和部分组别长期IgG抗体的变化情况,并检测了第四周时不同疫苗免疫的小鼠血清中IgGl和IgG2a的抗体水平；在一次免疫后第四周用致死量（20×LD50）同源流感病毒攻击部分组别的小鼠,包括添加人参多糖200μg、800μg、和2000μg的灭活疫苗组,疫苗单独组以及空白对照组,通过观察攻毒后小鼠的体重丢失率和存活率,来评价人参多糖作为佐剂对甲型H1N1流感病毒灭活疫苗的免疫增强效果。结果显示,与对应的单独灭活疫苗组相比,添加了不同剂量人参多糖的疫苗,均能显著提高小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a的抗体滴度,在第三周和第四周时,添加人参多糖800μg的灭活疫苗免疫组小鼠血清中的抗体滴度与添加了铝佐剂的灭活疫苗组效果相当,而且添加人参多糖能使IgG抗体滴度长期维持在一个较高的水平（至少三个月）。但人参多糖对于早期IgM的促进作用不大,其诱导的抗体水平与单独疫苗组相比没有显著性差异。在实验中,添加人参多糖的疫苗能增强小鼠抗致死量甲型H1N1流感病毒攻击的能力,且呈现出定的剂量规律,其中添加人参多糖800g的灭活疫苗保护率达到87.5%,与单独灭活疫苗保护率25%相比,有显著性提高。因此人参多糖可以作为佐剂增强甲型H1N1流感病毒灭活疫苗的免疫效果。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1. 流感病毒
• 1.1 流感病毒的生物学特征
• 1.2 2009年甲型H1N1流感病毒
• 2. 流感病毒疫苗
• 2.1 灭活疫苗
• 2.2 减毒活疫苗
• 3. 几种常用的疫苗佐剂
• 3.1 不溶性铝盐类
• 3.2 免疫刺激复合物
• 3.3 乳化佐剂
• 3.4 脂质体
• 3.5 分子佐剂
• 3.6 中药多糖佐剂
• 4. 人参多糖
• 第二章 人参多糖对甲型H1N1灭活疫苗免疫增强作用的研究
• 1. 引言
• 2. 材料
• 2.1 动物和病毒
• 2.2 主要试剂
• 2.3 主要仪器设备
• 2.4 所需溶液
• 3. 方法
• 3.1 甲型H1N1重组疫苗株（A/reassortant/NYMC X-179A）在BALB/c小鼠内的扩增
• 3.2 甲型H1N1重组疫苗株（A/reassortant/NYMC X-179A）对BALB/c小鼠LD50的测定
• 3.3 动物免疫方法及策略
• 3.4 ELISA方法检测抗体
• 3.5 病毒攻击
• 3.6 样本采集
• 3.7 小鼠流感症状及小鼠存活情况观察
• 3.8 统计分析
• 4. 实验结果
• 4.1 小鼠肺部传代甲型H1N1重组疫苗株流感病毒感染BALB/c小鼠半数致死量（LD50）的测定
• 4.2 人参多糖对甲型H1N1流感病毒灭活疫苗诱导产生抗体水平的影响
• 4.3 人参多糖作为佐剂对甲型H1N1流感病毒灭活疫苗免疫小鼠后抗致死量同源流感病毒保护能力的影响
• 5.讨论
• 结论
• 参考文献
• 缩写表
• 读研期间文章发表和录用情况
• 致谢