mTOR在白血病及白血病细胞株中的表达及意义

论文摘要

目的:研究白血病细胞中哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达情况;研究雷帕霉素对白血病细胞的增殖抑制作用以及其对细胞周期的影响;分析该药作用前后mTOR mRNA表达水平的改变。方法:1.采用实时荧光定量PCR检测白血病患者及白血病细胞株的mTOR mRNA表达情况。2.采用四唑氮蓝比色试验(MTT)观察雷帕霉素对白血病细胞株KG1,K562和U937的体外增殖抑制作用。3.应用流式细胞术(FCM)检测雷帕霉素干预后的白血病细胞株的细胞周期的阻滞情况。结果:1各组中mTOR mRNA表达情况1.1 mTOR mRNA在急性白血病中表达情况新近诊断急性白血病(AL)患者组mTOR mRNA表达水平明显高于正常对照组(P<0.05)。复发组mTOR mRNA表达水平高于正常对照组(P<0.05),高于AL组,但与AL组差别无统计学意义(P>0.05)。持续完全缓解组(CCR)mTOR mRNA表达水平低于AL组及复发组(P值均小于0.05),比正常对照组高,但无统计学差异(P>0.05)。mTOR mRNA在AML组M2、M3、M4、M5、M6各亚型间表达水平有差别,但各亚型间差别无统计学意义(P>0.05)。1.2 mTOR mRNA在慢性粒细胞白血病慢性期中表达情况慢性粒细胞白血病慢性期(CP)患者组mTOR mRNA表达水平明显高于正常对照(NC)组(P<0.05),低于新近诊断急性白血病组及复发组,差别有统计学意义(P<0.05)。2急性白血病(AL)患者mTOR mRNA表达情况与临床疗效的关系43例新近诊断AL患者中40例可进行疗效评估(1例早期死亡,2例未治疗)。33例获得完全缓解(CR),CR率83.3%(33/40),完全缓解组患者mTOR mRNA表达水平较治疗前mTOR mRNA表达水平明显降低,亦低于复发组,差别有统计学意义(p<0.05);高于正常对照组和CCR组,差别无统计学意义(p>0.05)。7例未完全缓解患者表达水平与治疗前mTOR mRNA表达水平有所升高,低于复发组患者,但与两组相比均无统计学意义(p>0.05);与缓解组和正常对照组相比差异显著(p<0.05)。3不同浓度雷帕霉素对白血病细胞株KG1、K562和U937的增殖抑制情况雷帕霉素作用浓度分别为1 nmol/L、10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L、500 nmol/L3.1雷帕霉素对KG1细胞株24h的增殖抑制率分别为31%、42%、70%、73%、78%、81%;且呈剂量依赖性。1 nmol/L、10 nmol/L与20 nmol/L组间有统计学意义(P<0.05)。随着雷帕霉素浓度的增大,抑制率亦在增加,但是与20 nmol/L组比较没有明显差异(P>0.05)。3.2雷帕霉素对K562细胞24小时的抑制率分别为9%、13%、18%、20%、21%、27%,随着剂量的增加抑制率增加,1 nmol/L与50 nmol/L、100 nmol/L、500 nmol/L三组间均有统计学意义(P<0.05),10 nmol/L、20nmol/L与500 nmol/L差异显著(P<0.05)。其余各组之间没有统计学意义(P>0.05)。3.3雷帕霉素对U937细胞24小时的抑制率为4%、6%、10%、12%、21%、26%,1 nmol/L与100 nmol/L、500 nmol/L两组间均有统计学意义(P<0.05),10 nmol/L、20nmol/L与500 nmol/L差异显著(P<0.05)。其余各组之间没有统计学意义(P>0.05)。4雷帕霉素诱导KG1、K562和U937细胞株的凋亡情况雷帕霉素作用前细胞胞膜完整无破损,胞浆透明无颗粒。雷帕霉素不同浓度分别作用KG1、K562和U937细胞24h后,可见到典型的细胞凋亡形态学改变,表现为细胞折光性减低,细胞体积变小、变形;随着药物作用时间延长,凋亡细胞的数量增加;药物作用到48小时后,折光性进一步减低,并且出现细胞裂解碎片,以KG1细胞株最明显。5不同浓度雷帕霉素作用于KG1、K562和U937细胞株后细胞周期的变化分别采用雷帕霉素0nmol/L 1 nmol/L、20nmol/L、100 nmol/L作用于白血病细胞株KG1、K562和U937 24h。KG1细胞G0/G1期细胞比例分别为50.88%、68.32%、83.54%、85.31%;K562细胞中G0/G1期细胞比例分别为41.13%、42.96%、54.05%、56.63%; U937细胞周期中G0/G1期细胞比例分别为38.17%、48.37%、50.54%、54.63%,与不加药的对照组相比, G0/G1期细胞比例均增加。6雷帕霉素作用于KG1、K562和U937细胞株后mTORmRNA表达水平应用0noml/L、1 nmol/L、20 nmol/L、100 nmol/L的雷帕霉素作用KG1、K562和U937细胞株24小时。KG1细胞中mTOR mRNA表达水平随着浓度的增加逐渐下降,20 nmol/L与100 nmol/L差别没有统计学意义(p>0.05),其余各浓度之间差别显著(p<0.05)。K562和U937细胞中mTOR mRNA表达水平随着雷帕霉素浓度的增加而下降,但1 nmol/L浓度组与对照组无明显差异(p>0.05),其余各浓度之间差别显著(p<0.05)。结论:1新近诊断AL组患者中mTOR mRNA表达水平明显高于正常对照组中mTOR mRNA表达水平。复发组患者mTOR mRNA表达水平明显高于NC组,CCR组患者中mTOR mRNA水平明显低于AL组及复发组,而与正常对照组无明显差别。2完全缓解组患者mTOR mRNA表达水平较治疗前mTOR mRNA表达水平明显降低,亦低于复发组,差别有统计学意义;高于正常对照组和CCR组,差别无统计学意义。7例未完全缓解患者表达水平与治疗前mTOR mRNA表达水平有所升高,低于复发组患者,但与两组相比均无统计学意义;与缓解组和正常对照组相比差异显著。3在慢性粒细胞白血病患者中,mTOR mRNA表达水平明显高于正常对照组,低于新近诊断白血病组和复发组mTOR mRNA表达水平,差别显著。4不同浓度的雷帕霉素作用于KG1细胞株,20nmol为最佳有效浓度,细胞可以被明显的抑制,细胞周期可以明显阻滞在G0/G1期,而且细胞凋亡明显,mTOR mRNA的表达水平亦显著降低。5不同浓度的雷帕霉素作用于K562和U937细胞株,随着雷帕霉素浓度的增加,K562和U937细胞株的抑制率增加,细胞周期阻滞更明显,凋亡亦在增加。K562和U937细胞株mTOR mRNA表达水平随着雷帕霉素浓度的增加,表达水平下降,1 nmol/L浓度组与对照组无明显差异(p>0.05),其余各浓度之间差别显著(p<0.05)。但与雷帕霉素作用于KG1细胞株相比,雷帕霉素对K562和U937细胞株的作用相对弱些。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 mTOR在白血病及白血病细胞株中的表达及意义
• 第一部分 mTOR在白血病患者中的表达及意义
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 雷帕霉素对白血病细胞株的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 mTOR与白血病治疗
• 正文
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历