表没食子儿茶素没食子酸酯体外对人结肠癌HT-29细胞生长抑制作用及机制研究

论文摘要

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallaocatechin-3-gallate,EGCG）对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响,并初步探讨其分子机制。方法:体外培养人结肠癌HT-29细胞,采用MTT比色法检测EGCG对HT-29细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术分析EGCG对HT-29细胞周期分布的影响;使用免疫细胞化学、免疫印迹等方法观测EGCG对HT-29细胞周期相关蛋白（p53、PCNA、p38MAPK、RB）表达的影响。结果:MTT比色结果显示EGCG能呈浓度依赖性抑制HT-29细胞的增殖。不同浓度EGCG（30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml）对HT-29细胞（24h、48h、72h、96h）具有明显的生长抑制效应,并呈剂量-效应和时间-效应依赖关系（P<0.05）;细胞活力检测结果显示,对照组与EGCG各浓度处理组细胞存活率差异无显著性（P>0.05）;光镜下,与对照组比较,处理组瘤细胞稀疏,数量明显减少,细胞异型性变小,形态较为一致,胞浆较丰富,核变小,大小较为一致,核浆比例增大,核仁不明显,胞浆内细胞器丰富;流式细胞术分析结果显示,EGCG诱导人结肠癌细胞G1期阻滞,且随着处理时间的延长,其诱导周期阻滞的效应越明显（P<0.05）,相同时间处理组,不同浓度处理与空白对照相比均发生了G1期阻滞（P<0.05）;免疫细胞化学图像定量分析显示:经EGCG（50μg/mL,48h）处理后,人结肠癌HT-29细胞中p53、PCNA蛋白阳性率较未处理组显著降低（P<0.05）;蛋白免疫印迹显示:EGCG能下调p38MAPK、RB蛋白的磷酸化水平,其作用与浓度和作用时间相关,能下调Cyclin D1蛋白的表达。结论:1.EGCG对体外培养的人结肠癌HT-29细胞具有明显的增殖抑制作用,并呈浓度-时间依赖关系。2.EGCG抑制HT-29细胞增殖作用与诱导细胞周期G1期阻滞有关。3.EGCG可能通过抑制p38MAPK、RB蛋白的磷酸化,下调Cyclin D1、p53、PCNA蛋白表达,诱导HT-29细胞G1期阻滞,抑制HT-29细胞增殖。

论文目录

• 一、 中文摘要
• 二、 英文摘要
• 三、 正文
• （一） 前言
• （二） 材料和方法
• （三） 结果
• （四） 讨论
• （五） 结论
• 四、 参考文献
• 五、 主要缩略语
• 六、 文献综述
• 七、 硕士期间发表的论文
• 八、 致谢