莪术油对肝星状细胞增殖凋亡及分泌细胞外基质的影响

论文摘要

目的:用不同浓度莪术油注射液作用于体外培养大鼠肝星状细胞T6细胞株（hepatic stellate cell-T6 strains, HSC-T6）,检测其对细胞增殖、凋亡及分泌细胞外基质的影响,以阐明莪术油注射液在治疗肝纤维化方面的作用机制。方法:用2.5μg/ml、5.0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的莪术油注射液处理体外高糖DMEM培养基培养的大鼠HSC-T6,分别作用12h、24h、48h后,以MTT比色法检测490nm波长处吸光度值,计算抑制率,筛选出与阳性药物作用有显著性差异的药物浓度作为实验分组;流式细胞仪和TUNEL法检测莪术油注射液对HSC-T6凋亡的影响;放射免疫法检测莪术油注射液对HSC-T6分泌IV型胶原（IV collagen ,CIV）、透明质酸（Hyaluronic acid ,HA）和层粘连蛋白（Laminin ,LN）的影响。设阴性对照组,把α干扰素（1000U/ ml）组作为阳性对照组。结果:（1）莪术油注射液作用于体外培养大鼠HSC-T6后,细胞增殖受到明显抑制,呈时间和浓度依赖性,各浓度组与阴性对照组相比较差异有显著性（ P< 0.05 ）,2.5μg/ml、5.0μg/ml组与阳性对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml浓度组与阳性对照组相比较,除10μg/ml浓度组作用12h、24h时差异无统计学意义（P>0.05）外,其余差异均有统计学意义（ P< 0.05 ）;40μg/ml组与HSC作用48h后,抑制率达82.6%,明显高于阳性对照组（41.4%）。（2）流式细胞仪分析:莪术油注射液10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml组、α干扰素组与HSC作用12h、24h、48h后,与阴性对照组相比较差异均有显著性（ P< 0.05 ）;与阳性对照组比较,除药物浓度组10μg/ml作用12h时差异无统计学意义外（P>0.05）,其余差异均有统计学意义（ P< 0.05 ）。TUNEL检测表明,光镜下细胞核中有棕黄色颗粒者为凋亡细胞,莪术油注射液40μg/ml组作用48h后凋亡率（48.39±6.14）%明显高于α干扰素组（26.90±4.32）%。（3）莪术油注射液10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml组作用于HSC-T6 48h均能不同程度抑制CIV、HA和LN分泌,与阴性对照组比较差异有显著性（ P< 0.05 ）;与阳性对照组比较,除药物浓度组10μg/ml抑制LN差异无统计学意义外（P>0.05）,其余差异均有统计学意义（ P< 0.05 ）。结论:莪术油注射液可明显抑制体外培养HSC-T6的增殖及分泌细胞外基质,并能显著促进HSC-T6凋亡,可能是莪术油注射液抗肝纤维化的作用机制之一。

论文目录

• 一、主要缩略英文索引
• 二、中文摘要
• 三、英文摘要
• 四、论文正文
• 引言
• 实验材料及仪器
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 五、综述
• 六、成果附录
• 七、致谢