紫茎泽兰细胞色素P450 CYP75基因的克隆与鉴定

论文摘要

根据菊科植物P450基因CYP7585（GenEMBL AF313489）、CYP7586（GenEMBL AF313488）和拟南芥CYP75家族成员的核酸序列同源区,以及经典细胞色素P450保守区域F××G×R×C×G设计引物,用RT-PCR方法首次从紫茎泽兰植物中获得两个大小分别为378bp和644bp的核酸序列。经克隆、测序后,将推导的氨基酸序列进行同源性分析,结果表明378bp核酸序列与CYP7585、CYP7586具有较高同源性,分别为79.5%、85.6%,提示该序列可能为GYP75B亚族中的一员;所得这两条核酸序列的同源性为100%,提示这两条核酸序列可能为同一基因或两个等位基因的部分cDNA片段。序列提交发现,这两条序列为紫茎泽兰P450基因研究在NOBI数据库中最早的两条记录,其中378bp核酸序列的GneBank序列接收号为AY954289,编码125个推导的氨基酸;644bp核酸序列的GenBank序列接收号为AY954290,编码214个推导的氨基酸。 克隆并分析了紫茎泽兰国内七个不同地理种群378bp核酸序列的同源性。同源性分析表明,七个不同地理种群的同源性高达99%以上,在靠近序列的5′端有三个位点出现单个碱基变换。由此推测CYP75家族在紫茎泽兰植株中比较保守,并且可能同时存在几个等位基因。此外,据CYP75家族成员的背景提示,在紫茎泽兰进化过程中这些等位基因可能直接或

论文目录

• 第一章 前言
• 1.1 外来入侵物种
• 1.1.1 外来入侵物种概念
• 1.1.2 我国外来入侵物种研究现状
• 1.2 植物化感作用
• 1.2.1 植物化感作用的相关概念
• 1.2.2 植物化感物质的种类和分布
• 1.2.3 植物化感作用与进化的关系
• 1.3 细胞色素P450
• 1.3.1 植物中P450的分布与含量
• 1.3.2 细胞色素P450功能
• 1.3.3 P450的分子生物学特性
• 1.3.4 P450与植物的遗传演化
• 1.3.5 植物P450的研究展望
• 1.4 紫茎泽兰
• 1.4.1 紫茎泽兰的生物学特性
• 1.4.2 紫茎泽兰的分布与为害
• 1.4.3 紫茎泽兰化感物质及其化感作用
• 1.4.4 紫茎泽兰的综合防治
• 1.4.5 紫茎泽兰研究展望
• 1.5 本项目研究的意义
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 引物设计
• 2.3 主要实验仪器
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 RNA提取
• 2.4.2 cDNA反转录
• 2.4.3 PCR扩增
• 2.4.4 PCR产物回收纯化
• 2.4.5 PCR产物克隆
• 2.4.6 序列分析
• 第三章 结果与分析
• 3.1 RNA的提取分析
• 3.2 cDNA反转录效率分析
• 3.3 PCR反应体系优化
• 3.4 紫茎泽兰378bp cDNA片段的克隆与鉴定
• 3.4.1 PCR扩增与目的片段的克隆
• 3.4.2 序列分析
• 3.5 七个不同地理种群378bp cDNA片段的同源性比较分析
• 3.6 紫茎泽兰644bp cDNA片段的克隆与分析
• 3.6.1 PCR扩增目的片段
• 3.6.2 序列分析
• 第四章 讨论
• 4.1 紫茎泽兰378bp cDNA片段的克隆和鉴定
• 4.2 紫茎泽兰七个不同地理种群378bpcDNA片段的克隆和比较
• 4.3 紫茎泽兰644bp cDNA片段的克隆和分析
• 第五章 研究展望
• 参考文献
• 致谢
• 附图
• 攻读学位期间发表的学术论文