茶梨组织培养的初步研究

论文摘要

茶梨（Anneslea fragrans Wall.）属山茶科茶梨属常绿乔木,树形美观,通直圆满,枝叶繁茂,果形奇特,嫩叶鲜艳夺目；树皮、树叶可药用,是一个极有发展前景的用材、药用、园林观赏树种。但迄今为止,人们对它的研究和报道甚少,甚至鲜为人知。湖南省新宁县罗汉洞林区发现茶梨天然林,由于人们对森林经营的盲目性,亚热带低海拔地区的常绿阔叶林遭到大面积的砍伐,导致其资源的急剧减少。同时,茶梨本身具有某些生物的脆弱性,天然更新能力差,滥砍滥伐导致本种资源濒临灭绝的边缘。进行茶梨组织培养快速繁殖技术研究,为保护我国珍贵的茶梨资源和茶梨苗木的产业化提供思路和技术,在理论研究和实际应用中都具有十分重要的意义。本研究以茶梨果实、带芽茎段、叶片、茎段及花为材料系统地研究了茶梨组织培养直接和间接器官发生途径的各个培养阶段中基本培养基、生长调节剂和活性炭等因素的影响,筛选出了各阶段的适宜培养基,成功地获得了茶梨组织培养再生植株。初代培养阶段,茶梨的种子以0.2%升汞5min+0.1%升汞8min消毒效果较好,茶梨嫩叶片和茎段0.1%升汞消毒6min时效果最好,茶梨野外实生苗的花的消毒效果不理想。通过正交试验方案,.以茶梨种子、顶芽、叶和茎段等为外植体,诱导顶芽的萌发和愈伤组织的发生。结果表明,MS+1.0mg·L’1BA+0.1mg·L-1NAA为诱导茶梨芽萌发的适宜培养基；以二年生实生苗的叶和茎段为外植体诱导愈伤组织,适宜的培养基分别为MS+2.0+0.5mg·L-12,4-D+2.0mg·L-1NAA和MS+2.0mg·L-1BA+1.0mg·L-1NAA,这个结果同样适用于茶梨无菌芽叶片和叶柄诱导愈伤组织。继代增殖培养阶段,通过L9（33）正交试验,得出适于诱导茶梨芽的增殖培养基为MS+BA2.0mg·L-1+TDZ0.1mg·L-1;愈伤组织增殖培养则以MS+1.Omg·L-1BA+0.5mg·L-1NAA+0.01mg·L-1TDZ为宜,增殖速度快,褐化程度小。分化培养阶段,通过L16（44）正交试验,得出以无菌苗带芽茎段诱导腋芽的萌发以MS+2.0mg·L-1BA为最适培养基,将该结论应用于野外采集的茶梨带芽茎段同样获得了成功,诱导率达63.4%；通过L9（33）正交试验得出愈伤组织诱导芽的分化以MS+2.0mg·L-1BA+0.05mg·L-1TDZ+0.1mg·L-1IBA为适宜培养基。壮苗培养阶段,WPM+1.0mg·L-1BA+1.0mg·L-1NAA为适宜培养基；生根阶段,从生根的初探试验显示,较适培养基为WPM+1.0mg·L-1NAA+0.5g·L-1AC。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 绪言
• 1.1 植物组织培养发展历程及其应用
• 1.1.1 植物快速繁殖和无病毒种苗生产
• 1.1.2 植物花药培养和单倍体育种
• 1.1.3 植物胚胎培养
• 1.1.4 愈伤组织或细胞悬浮培养生产有用次生代谢物
• 1.1.5 原生质体培养和细胞事融合
• 1.1.6 植物细胞突变体筛选
• 1.1.7 植物体细胞胚胎和人工种子
• 1.2 山茶科植物组织培养的研究现状
• 1.2.1 山茶科植物组织培养研究进展
• 1.2.2 山茶科植物组织培养技术概况
• 1.3 茶梨的研究现状
• 1.3.1 茶梨研究简史
• 1.3.2 茶梨的分布
• 1.3.3 茶梨的形态特征及其生长特性
• 1.3.4 茶梨濒危的原因
• 1.3.5 茶梨的引种繁殖研究现状
• 2 材料与方法
• 2.1 主要研究内容和技术线路
• 2.1.1 主要研究内容
• 2.1.2 技术线路
• 2.2 材料
• 2.2.1 试验材料
• 2.2.2 实验仪器设备
• 2.2.3 常用药品
• 2.3 方法
• 2.3.1 外植体的选择及处理
• 2.3.2 继代培养
• 2.3.3 分化培养
• 2.3.4 壮苗培养
• 2.3.5 生根培养
• 2.3.6 生根后壮苗培养
• 2.4 培养基和培养条件
• 3 结果与分析
• 3.1 外植体的消毒
• 3.2 初代培养
• 3.2.1 茶梨顶芽初代培养
• 3.2.2 茶梨顶芽初代培养中愈伤组织的发生
• 3.2.3 叶和茎段诱导愈伤组织
• 3.3 继代培养
• 3.3.1 芽的增殖培养
• 3.3.2 愈伤组织的增殖培养
• 3.4 分化培养
• 3.4.1 带芽茎段诱导芽的分化
• 3.4.2 愈伤组织诱导芽的分化
• 3.5 壮苗培养
• 3.6 生根培养
• 4 结论与讨论
• 4.1 结论
• 4.2 讨论
• 4.2.1 外植体的选择对茶梨组织培养的影响
• 4.2.2 外植体的消毒
• 4.2.3 基本培养基对茶梨组织培养的影响
• 4.2.4 生长调节剂对茶梨组织培养的影响
• 4.2.5 本文的创新性
• 5 对下一步工作的建议
• 参考文献
• 附录A
• 附录B
• 附图
• 攻读学位期间的主要学术成果
• 致谢