一、Ca~(2+) signals induced from calcium stores in pancreatic islet β cells（论文文献综述）
向佳佳[1]（2021）在《特异性敲除小鼠胰岛β细胞SNX16对葡萄糖诱导的胰岛素合成与分泌的影响》文中指出实验目的:胰岛素是胰腺胰岛β细胞释放的一种具有降低血糖作用的蛋白质激素。胰岛β细胞受内源性或外源性物质刺激如葡萄糖、乳糖、胰高血糖素等可释放胰岛素,机体胰岛素分泌绝对或者相对不足都将导致以高血糖为特征的代谢性疾病-糖尿病。分选连接蛋白家族（Sorting Nexins,SNXs）是一类含有吞噬细胞氧化酶同源性结构域（Phoxhomology domain,PX domain）的蛋白。研究表明,分选连接蛋白在细胞内吞、蛋白分选、细胞信号转导、膜运输、膜重塑和细胞器运动等方面起重要作用。分选连接蛋白16（Sorting Nexin 16,SNX16）是SNXs家族的一员,研究表明,SNX16参与调节机体发育、肿瘤、心血管疾病的发生。然而,SNX16对血糖稳态的影响尚未见报道。本研究旨在利用胰岛β细胞特异性敲除SNX16小鼠探究SNX16对机体血糖稳态以及胰岛素的合成与分泌的影响。实验方法:1.胰岛β细胞特异性SNX16敲除鼠的制备及鉴定:利用胰岛β细胞特异性表达Cre酶的小鼠与SNX16 Lox P小鼠交配,得到胰岛β细胞缺失SNX16的子代小鼠。提取小鼠尾尖基因组DNA,进行基因型鉴定。体外分离小鼠胰岛,利用Western-blot和Q-PCR技术检测SNX16表达水平及其敲除效率。同时带有Lox P和Cre序列的为胰岛β细胞特异性敲除SNX16鼠为实验组（FF+）,仅含Lox P序列的小鼠为对照组（FF-）。2.能量代谢测定:利用小动物代谢笼检测小鼠能量代谢情况,分别在正常饮水和11%葡萄糖溶液饮水的条件下检测和比较小鼠的进食量、饮水量、二氧化碳分压（VCO2）和氧气分压（VO2）等代谢参数。3.小鼠糖耐量实验和胰岛素耐量实验:两组小鼠禁食不禁水16小时后,腹腔注射葡萄糖溶液或者胰岛素后检测不同时间点的血糖值。4.小鼠血中胰岛素含量检测:将两组小鼠禁食不禁水6小时后,腹腔注射葡萄糖溶液,分别于0 min,注射后30 min、60 min后收集分离小鼠血清,采用胰岛素Elisa检测试剂盒测定两组小鼠血清样本中的血清胰岛素含量。5.免疫组织化学检测:小鼠禁食不禁水6小时后,腹腔注射生理盐水或葡萄糖溶液,1小时后分离出胰腺,将胰腺固定、脱水、包埋、切片,免疫组化和免疫荧光检测β细胞中胰岛素的含量,HE染色检测胰腺组织结构。6.检测SNX16对胰岛素相关基因表达的影响:提取原代胰岛组织以及建立Beta-TC-6过表达SNX16细胞模型,给予不同浓度葡萄糖刺激,收集细胞后提取总蛋白质和总RNA,Western-blot技术和Q-PCR技术检测相应的蛋白和基因表达情况。7.胞浆游离钙水平检测:利用Fura-3AM荧光探针检测过表达SNX16对葡萄糖刺激后Beta-TC-6胞内游离钙的响应情况。实验结果:1.PCR基因型鉴定结果显示,SNX16 Lox P小鼠与小鼠胰岛β细胞特异性表达Cre酶的小鼠交配后,成功得到胰岛β细胞特异性敲除SNX16小鼠;Western-blot和Q-PCR结果显示,FF+组小鼠胰岛组织中SNX16蛋白和m RNA的表达含量明显下降;2.小动物代谢笼结果显示,在普通饮水条件下,两组小鼠的饮食饮水及能量代谢情况没有明显改变;在11%葡萄糖溶液饮水条件下,FF+组小鼠能量代谢异常,血糖水平明显增加;3.糖耐量结果显示,与对照组相比,FF+组小鼠在注射葡萄糖溶液后30分钟时表现出更高的血糖值。胰岛素耐量结果显示,FF+组与FF-组没有明显差异;4.胰岛素Elisa试剂盒检测结果显示,腹腔注射葡萄糖后30分钟后,FF+组血清中的胰岛素含量明显低于对照组,表明胰岛β细胞特异性敲除SNX16可导致胰岛素分泌减少;5.免疫组织化学和免疫荧光结果显示,敲除SNX16的胰岛β细胞中胰岛素含量明显减少;HE结果显示,胰岛β细胞特异性敲除SNX16对胰腺组织结构没有明显影响;6.Western blot和Q-PCR结果显示,SNX16的缺失引起胰岛素原基因表达明显减少,而过表达SNX16会导致胰岛素合成增加,胰岛素原基因表达量上升;7.胞浆钙检测结果显示,过表达SNX16明显上升Beta-TC-6细胞系中葡萄糖诱导的钙离子内流。结论:特异性敲除小鼠胰岛β细胞SNX16明显减少葡萄糖诱导的胰岛素合成与分泌,降低小鼠的葡萄糖耐受。Beta-TC-6细胞系中过表达SNX16明显增加葡萄糖诱导的胰岛素合成与分泌,显着增加葡萄糖刺激下β细胞胰岛素分泌的第一时相和第二时相钙离子内流,从而导致胰岛素分泌增加。我们的结果表明,SNX16可能通过影响胰岛素合成和分泌参与机体血糖稳态的调节。
贺琼[2]（2021）在《S1P磷酸酶2调节胰岛β细胞增殖和内质网应激的关键基因筛选及文献计量学分析》文中指出目的:探究S1P磷酸酶2（S1P phosphatase 2,SPPase2）调节胰岛β细胞增殖和内质网应激的关键基因。应用文献计量学的方法探讨关键基因研究领域的进展趋势和研究前沿。方法:GSE73131芯片数据集来自GEO数据库,选取SPPASE2基因敲除与野生型小鼠差异表达的基因,构建蛋白互作分析网络（Pro-tein-Protein Interaction,PPI）,将关键基因用STRING和Cytoscape软件进行模块化以分析锁定关键基因。通过分析从1986年至2020年之间的Web of Science科学扩展数据库检索的相关文献,使用CiteSpace和VOSviewer软件对国家,机构,作者,关键词等对关键基因相关文献进行文献计量学共现分析。结果:与野生型小鼠相比,SPPase2基因敲除组小鼠共筛选出150个上调基因和30个下调基因,其涉及到的功能主要集中在1型糖尿病、趋化因子信号通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用、细胞黏附分子、产生IgA的肠道免疫网络方面。模块化分析后最终确定了一个枢纽基因,即CD48基因。对CD48基因进行文献计量学分析,发现最近十年出版物的数量基本维持在年均20-30篇的增幅。美国（n=115,43.7%）,中国（n=32,12.2%）,德国（n=29,11.0%）是CD48基因研究领域全球文章贡献量最大的三个国家。此外,哈佛大学（n=15,美国）、耶路撒冷希伯来大学（n=14,以色列）、美国食品和药品监督管理局（n=9,美国）是发文量排名前三的机构。CD48相关的研究细胞类型随着时间的推移分别为2012年左右的自然杀伤细胞、嗜碱性粒细胞、吞噬细胞,到2014年左右的红细胞、血小板、基质细胞,再到2016年附近的造血干细胞,以及2018年前后的血液白细胞和2020年最近的自噬细胞。结论:对于鞘脂代谢异常引发的糖尿病,CD48基因可能是潜在的研究和治疗靶点基因。目前CD48研究在血液系统疾病的方面相较其它系统的疾病更充分,其余内分泌系统如糖尿病相关研究开展甚少,因此研究潜力较大。
Jing-Dan Jia,Xu Luo,Rong-Rong Li,Ya-Na Li,Wen-Guo Jiang,Geng Tian,Yu-Chi Zhao[3]（2021）在《Vascular endothelial growth factor B inhibits insulin secretion in MIN6 cells and reduces Ca2+ and cyclic adenosine monophosphate levels through PI3K/AKT pathway》文中认为BACKGROUND Type 2 diabetes（T2 D） is characterized by insufficient insulin secretion caused by defective pancreatic β-cell function or insulin resistance,resulting in an increase in blood glucose.However,the mechanism involved in this lack of insulin secretion is unclear.The level of vascular endothelial growth factor B（VEGF-B） is significantly increased in T2 D patients.The inactivation of VEGF-B could restore insulin sensitivity in db/db mice by reducing fatty acid accumulation.It is speculated that VEGF-B is related to pancreatic β-cell dysfunction and is an important factor affecting β-cell secretion of insulin.As an in vitro model of normal pancreatic β-cells,the MIN6 cell line can be used to analyze the mechanism of insulin secretion and related biological effects.AIM To study the role of VEGF-B in the insulin secretion signaling pathway in MIN6 cells and explore the effect of VEGF-B on blood glucose regulation.METHODS The MIN6 mouse pancreatic islet β-cell line was used as the model system.By administering exogenous VEGF-B protein or knocking down VEGF-B expression in MIN6 cells,we examined the effects of VEGF-B on insulin secretion,Ca2+ and cyclic adenosine monophosphate（cAMP） levels,and the insulin secretion signaling pathway.RESULTS Exogenous VEGF-B inhibited the secretion of insulin and simultaneously reduced the levels of Ca2+ and cAMP in MIN6 cells.Exogenous VEGF-B also reduced the expression of phospholipase C gamma 1（PLCγ1）,phosphatidylinositol 3-kinase（PI3 K）,serine/threonine kinase（AKT）,and other proteins in the insulin secretion pathway.Upon knockdown of VEGF-B,MIN6 cells exhibited increased insulin secretion and Ca2+ and cAMP levels and upregulated expression of PLCγ1,PI3 K,AKT,and other proteins.CONCLUSION VEGF-B can regulate insulin secretion by modulating the levels of Ca2+ and cAMP.VEGF-B involvement in insulin secretion is related to the expression of PLCγ1,PI3 K,AKT,and other signaling proteins.These results provide theoretical support and an experimental basis for the study of VEGF-B in the pathogenesis of T2 D.
杨晓华[4]（2020）在《新型小分子GLP-1R激动剂S6促进大鼠胰岛素分泌的初步机制研究》文中研究说明目的:筛选鉴定新型小分子GLP-1R激动剂S6对葡萄糖刺激的大鼠胰岛素分泌的影响及其机制。方法:1)基于药效团模型的虚拟筛选与分子对接技术相结合的方法筛选小分子化合物。2)FLIPR?荧光成像检测系统检测筛选化合物与GLP-1R结合后细胞内钙离子浓度变化。3)胰岛素分泌实验观察不同条件下的S6对胰岛素分泌的作用。4)钙离子成像技术检测在不同条件下S6对胰岛β细胞内钙离子浓度的影响。5)全细胞膜片钳技术探究S6在不同条件下对胰岛β细胞电压依赖性钙（VDCC）通道、电压依赖性钾（Kv）通道以及动作电位时程的影响。6)利用CETSA技术观察S6对GLP-1R的靶向作用。结果:1)通过虚拟筛选和分子对接结合的方法从ZINC小分子数据库筛选出5809种化合物,后续进行基于口服化合物理化性质的筛选,有108种化合物符合要求,最终购买到30个商业性化合物。2)30个待测化合物中有16个化合物表现出GLP-1R激动效应,其中S6具有最高激动作用。3)胰岛素分泌结果表明,S6具有促进大鼠胰岛素分泌的作用。4)钙离子成像技术显示S6可增加细胞内Ca2+浓度。5)膜片钳实验结果显示S6可抑制电压依赖性钾（Kv）通道电流,延长胰岛β细胞动作电位时程。6)膜片钳实验结果显示S6对电压依赖性钙通道没有直接作用。7)胰岛素分泌实验和钙离子成像技术结果共同表明S6增加细胞内Ca2+水平与细胞内钙库释放有关。8)CETSA结果显示:随着温度升高,GLP-1R的表达呈下降趋势,且在同一温度下,S6干预组GLP-1R的表达高于对照组。9)胰岛素分泌结果表明:S6促进胰岛素分泌作用被GLP-1R阻断剂Exendin（9-39）阻断。10)膜片钳实验结果显示Exendin（9-39）削弱了S6对电压依赖性钾（Kv）通道的抑制作用。11)钙离子成像技术显示S6增加细胞内Ca2+浓度的作用被Exendin（9-39）消除。结论:S6仅在高葡萄糖浓度下发挥胰岛素分泌作用,而且S6的促分泌作用具有葡萄糖浓度依赖性。由此表明S6在发挥降低高血糖的同时,极大的降低了其诱发低血糖的风险。S6通过作用于GLP-1R,抑制β细胞电压依赖性钾（Kv）通道,延长动作电位时程,增加电压依赖性钙（VDCC）通道的开放时间,促使细胞内钙离子浓度升高,最终触发胰岛素分泌。此外S6也可以通过细胞内钙库释放途径增加细胞内钙离子水平。以上研究结果揭示了小分子GLP-1受体激动剂S6的促胰岛素作用及机制,为后续的深入研究奠定了基础。
石洁[5]（2020）在《刺槐素对游离脂肪酸诱导的胰岛β细胞损伤的保护机制研究》文中进行了进一步梳理目的:糖尿病作为仅次于心脑血管疾病和肿瘤的第三大非传染性疾病,已经严重威胁人们的生命与健康。因此,阐明糖尿病的致病机制已成为当前医学研究的热点。脂毒性是糖尿病发病的危险因素,其诱导的胰岛β细胞损伤是糖尿病发生发展的关键环节。然而,脂毒性介导的胰岛细胞损伤的具体机制尚不明确。因此,筛选拮抗脂毒性的天然药物显得尤为重要。刺槐素是从维管植物中提取出的天然黄酮类化合物,具有抗氧化、抗炎、降糖等广泛的药理活性,在糖尿病防治方面具有广阔的应用前景。本文旨在探究游离脂肪酸（free fatty acid,FFA）导致胰岛细胞损伤的分子机制及刺槐素改善高脂诱导胰岛损伤的作用机制,从而为糖尿病的防治提供理论依据。方法:体外培养大鼠RINm5F胰岛β细胞,对其分组如下:将细胞分为空白对照组、刺槐素单独处理组、FFA处理组以及刺槐素+FFA联合处理组。以MTT法检测细胞活力;DCF-DA法检测细胞内活性氧（ROS）的生成;分别用real-time PCR、western blot、酶活检测试剂盒检测抗氧化酶如过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）的水平;PI染色后流式检测sub-G1亚二倍体凋亡细胞含量;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白如剪切形式的腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）和cleaved caspase-3的表达情况;Rhod-2法检测线粒体钙离子（Ca2+）的浓度变化;Western blot检测内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）相关蛋白包括葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、磷酸化的蛋白激酶R样内质网激酶（p-PERK）、磷酸化的真核翻译起始因子2α（p-eIF2α）、剪切形式的激活转录因子6（cleaved ATF6）、cleaved caspase-12和C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达情况;RT-PCR法检测X盒结合蛋白1（XBP1）是否发生剪切;采用siRNA探针敲低CHOP后,MTT法检测FFA毒性的变化和刺槐素细胞保护效应的变化,Rhod-2法检测线粒体Ca2+的浓度变化情况,PI染色法和western blot检测CHOP对细胞凋亡情况的影响。结果:不同浓度（0.25-0.45 mmol/L）的FFA能够引起RINm5F β细胞活力显着下降,并呈浓度依赖性关系,且FFA的IC50约为0.35 mmol/L;不同浓度（10-25 μmol/L）的刺槐素单独处理对细胞无明显毒性效应,且该浓度范围内的刺槐素预处理能够改善FFA引起的细胞活力下降,当刺槐素浓度为15 μmol/L时,保护效果最明显;刺槐素预处理显着抑制FFA诱导的ROS的生成,并从转录、蛋白表达及酶活三个水平减少FFA介导的抗氧化酶（CAT、SOD、GPx）的损失;FFA处理也能够增加sub-G1亚二倍体凋亡细胞的含量,并使凋亡相关蛋白（cleaved PARP、cleaved caspase-3）的表达上调,而刺槐素预处理后可以显着改善凋亡情况;刺槐素预处理除了能够抑制FFA诱导的线粒体内Ca2+负载,还可以显着抑制FFA诱导的ERS相关蛋白（GRP78、p-PERK、p-eIF2α cleaved ATF6、cleaved caspase-12 和CHOP）的表达增加和XBP1的剪切;敲低CHOP的表达可以缓解FFA诱导的细胞损伤并加强刺槐素的细胞保护作用。结论:刺槐素可以通过抑制细胞内氧化应激和ERS来保护RINm5F胰岛β细胞免受脂毒性介导的胰岛损伤,且刺槐素对胰岛细胞的保护作用可能与CHOP介导的凋亡途径密切相关。
陈冲[6]（2018）在《胞外葡萄糖对INS-1细胞电压门控Na+通道活性的调控作用及其机制研究》文中提出研究背景/目的:胰岛β细胞功能的正常发挥对于维持机体葡萄糖稳态十分重要,β细胞通过分泌胰岛素响应机体内升高的葡萄糖水平,而在胰岛素分泌过程中,涉及电压门控离子通道参与的离子机制,比如钾通道（potassium channel/K+channel）和钙通道(calcium channel/Ca2+channel),然而,在β细胞中,电压门控钠通道（voltage-gated sodium channel,VGSC/NaV）在响应葡萄糖分泌胰岛素过程中,其生理功能尚不明确。本研究的目的是确定胞外葡萄糖对VGSC的调节作用。方法:运用全细胞膜片钳记录技术研究胰岛素分泌细胞系大鼠INS-1细胞胞外葡萄糖对VGSC电流(INa)的影响,分别采用酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA）和甲基噻唑基二苯基四氮唑法（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium Bromide assay,MTT）测定葡萄糖对胰岛素含量和细胞存活率的影响。结果:研究表明,胞外应用葡萄糖能显着抑制INa幅度,且该抑制作用呈浓度依赖性。其中,18 mM浓度葡萄糖能有效抑制INa幅度及其稳态激活过程,同时使得VGSC的稳态失活曲线向超极化方向移动,并且延长VGSC的复活时程,此外,18 mM葡萄糖能增强VGSC的活性依赖性衰减作用,降低活化通道的比例,此外,与低浓度（0.1μM和0.2μM）河豚毒素（tetrodotoxin,TTX,VGSC特异性阻断剂）作用一致,18 mM葡萄糖还能够部分抑制VGSC的活动,并促进胰岛素合成。结论:胞外应用高浓度葡萄糖能促进INS-1细胞中胰岛素的合成,其中相关机制涉及部分抑制INa通道,研究结果表明,VGSC在调节机体血糖稳态中起着至关重要的作用。
NITA Lulia I.,HERSHFINKEL Michal,SEKLER Israel[7]（2015）在《Life after the birth of the mitochondrial Na+/Ca2+ exchanger,NCLX》文中认为Powered by the mitochondrial membrane potential,Ca2+ permeates the mitochondria via a Ca2+ channel termed Ca2+ uniporter and is pumped out by a Na+/Ca2+ exchanger,both of which are located on the inner mitochondrial membrane.Mitochondrial Ca2+ transients are critical for metabolic activity and regulating global Ca2+ responses.On the other hand,failure to control mitochondrial Ca2+ is a hallmark of ischemic and neurodegenerative diseases.Despite their importance,identifying the uniporter and exchanger remains elusive and their inhibitors are non-specific.This review will focus on the mitochondrial exchanger,initially describing how it was molecularly identified and linked to a novel member of the Na+/Ca2+ exchanger superfamily termed NCLX.Molecular control of NCLX expression provides a selective tool to determine its physiological role in a variety of cell types.In lymphocytes,NCLX is essential for refilling the endoplasmic reticulum Ca2+ stores required for antigen-dependent signaling.Communication of NCLX with the store-operated channel in astroglia controls Ca2+ influx and thereby neuro-transmitter release and cell proliferation.The refilling of the Ca2+ stores in the sarcoplasmic reticulum,which is controlled by NCLX,determines the frequency of action potential and Ca2+ transients in cardiomyocytes.NCLX is emerging as a hub for integrating glucose-dependent Na+ and Ca2+ signaling in pancreatic β cells,and the specific molecular control of NCLX expression resolved the controversy regarding its role in neurons and β cells.Future studies on an NCLX knockdown mouse model and identification of human NCLX mutations are expected to determine the role of mitochondrial Ca2+ efflux in organ activity and whether NCLX inactivation is linked to ischemic and/or neurodegenerative syndromes.Structure-function analysis and protein analysis will identify the NCLX mode of regulation and its partners in the inner membrane of the mitochondria.
常国营[8]（2014）在《Sidt2基因敲除对小鼠胰岛素分泌及骨骼肌影响研究》文中指出第一部分Sidt2基因全身敲除小鼠胰岛素分泌障碍的机制研究目的:研究Sidt2蛋白在小鼠胰腺胰岛的表达与定位,进一步探讨Sidt2基因缺陷小鼠胰岛素分泌障碍的可能机制。对象和方法:通过qRCR、Western blotting和免疫荧光方法检测Sidt2蛋白在野生小鼠、Sidt2基因敲除(Sidt2-/-)小鼠胰岛及INS-1细胞株的表达及定位情况。检测野生及Sidt2-/-胰岛β细胞在高剂量葡萄糖刺激下胰岛素分泌通路中各指标的变化:NADPH（荧光测定和酶循环方法）,KATP、KV2.1电流及胞内游离钙离子浓度（膜片钳,Fura-2/AM探针）,膜电位和胰岛素分泌颗粒pH（激光共聚焦,Lysosensor DND-189）;流式检测野生及Sidt2-/-小鼠原代培养成纤维细胞溶酶体pH。结果:Sidt2在野生小鼠胰腺β细胞及INS-1细胞株表达,并定位于胰岛素分泌颗粒亚细胞器上。高剂量葡萄糖刺激下,Sidt2-/-小鼠胰岛β细胞NADPH变化、KATP和KV2.1电流和膜电位指标正常,而钙离子信号反应受损（增幅较低、反应时间延迟）。在胞外零钙外液情况下,野生组[Ca2+]i对高剂量葡萄糖反应减弱,Sidt2-/-组β细胞基本无反应。用内质网钙泵阻断剂2-APB或ryanodine干预后,两组峰值均降低,Sidt2-/-组[Ca2+]i峰值仍低于野生组,但两组降低幅度一致。用H+-ATP酶Bafilomycin A1干预可引起两组细胞[Ca2+]i升高,进一步用20 mM葡萄糖刺激两组细胞Ca2+反应一致,提示Sidt2-/-胰岛β细胞酸性细胞器钙离子反应受损。另外,两组成纤维细胞溶酶体及胰岛β细胞胰岛素分泌颗粒pH正常。在酸性细胞器第二信使NAADP孵育条件下Sidt2-/-胰岛β细胞Ca2+对高剂量葡萄糖反应正常。CD38检测显示高剂量葡萄糖刺激下野生及Sidt2-/-胰岛CD38表达量均增高,两组无统计学差异。结论:Sidt2基因缺陷导致胰岛β细胞NAADP信号不足,酸性细胞器钙库释放障碍,最终导致胞内Ca2+信号受损。Sidt2蛋白参与了胰岛β细胞胞内NAADP信号的调控,其可能作为酸性细胞器NAADP转运通道。第二部分骨骼肌特异性敲除Sidt2小鼠骨骼肌的影响研究目的:探讨Sidt2基因敲除导致骨骼肌病变与糖代谢异常的病理生理关系。分析骨骼肌特异性Sidt2敲除对骨骼肌表达谱的影响,寻找差异性表达基因及通路分析,以期从靶基因的角度揭示Sidt2基因缺陷致骨骼肌病变的分子机制。对象和方法:利用骨骼肌特异性表达Cre重组酶小鼠模型与已有Sidt2f lox/flox或Sidt2f lox/-小鼠交配繁殖建立骨骼肌特异性敲除Sidt2小鼠模型;转棒实验评定模型小鼠肌力受损情况,HE染色和电镜观察骨骼肌病理和超微结构改变;空腹血糖测定和糖耐量实验检测模型小鼠糖代谢情况。并进一步利用小鼠表达谱芯片Mouse Gene ST 2.0 Array,分析骨骼肌特异性Sidt2基因敲除对骨骼肌表达谱的影响。结果:骨骼肌特异性Sidt2敲除小鼠8w即出现四肢肌力明显受损和病理改变,且随着年龄增加病变加重。追踪至6个月龄模型小鼠空腹血糖及糖耐量均正常。基因表达谱芯片分析共发现显着性表达差异基因共590条（上调432,下调158）。对差异基因进一步进行通路分析共发现183条信号通路变化显着（上调130,下调53）。上调通路主要包括:吞噬、溶酶体和肌动蛋白调控等;下调通路主要涉及代谢通路和钙离子信号通路。结论:Sidt2基因敲除可直接导致骨骼肌病变,观察至6个月龄模型小鼠尚未发生糖代谢异常。钙离子信号通路可能亦是骨骼肌病变的致病原因。
易凡,李栋,马伟志,杜权[9]（2013）在《GLP-1生物学及基于GLP-1的抗糖尿病药物研究（英文）》文中研究指明在过去的几十年中,环境和生活方式的改变使得2型糖尿病患者的数量急剧增加, 其中一个重要的病理基础是胰岛素分泌缺陷。胰高血糖素样肽1（GLP-1）是一种由肠道细胞产生及分泌的多肽激素, 该激素以葡萄糖浓度依赖性方式促进胰岛β细胞分泌胰岛素, 调节血糖水平。研究表明GLP-1是糖尿病治疗中的一个有效靶点, 药物研发目前主要集中于GLP-1受体激动剂和降解酶抑制剂两个方面。以其强大的生物学活性为基础, GLP-1药物在临床上表现出高效、低副作用的显着优势。在此, 我们对GLP-1生物学和基于GLP-1的抗糖尿病药物研发进行综述。
路国兵[10]（2012）在《桑叶多糖MLPⅡ的抗糖尿病作用及其机制研究》文中研究指明桑科桑属（Morus.L.）植物的叶子除用作家蚕饲料外,还具有药食功能,其可作为治疗消渴症的中药应用于临床。《本草纲目》中记载:桑叶“汁煎代茗,能止消渴”;“灸熟煎饮,代茶止渴”;《神农本草经》中称桑叶为“神仙叶”,性寒、味甘苦,具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目之功效。现代药理学研究证明,桑叶具有抑制血糖上升的作用,可预防和治疗糖尿病。桑叶化学成分主要有黄酮类化合物、生物碱、多糖、叶蛋白等几类。其中,国内外研究较多的桑叶降糖活性成分为生物碱1-脱氧野尻霉素（1-DNJ）,以其为模板开发出的亚氨基糖类药物—米格列醇也已获批上市,广泛应用于糖尿病的治疗。与生物碱1-DNJ相比,目前关于其他桑叶化学成分的降糖作用及其机制的研究还不够深入系统。多糖是桑叶中的又一降糖活性成分,已有研究表明其具有显着的降血糖作用,且与生物碱1-DNJ相比其在桑叶中的含量更为丰富。但目前国内外与桑叶多糖降糖活性相关的研究大多集中于多糖粗提物降低血糖的初步研究,而对其确切的降糖活性组分和具体降糖机理的研究还不够深入,实验证据较少,无法为桑叶多糖的药用开发提供依据。鉴于此,本研究室从湖桑叶片中分离提纯得到一种具有降糖活性的均一多糖组分MLPⅡ,测定了该多糖组分的结构组成,深入探讨了该多糖组分对2型糖尿病大鼠的治疗作用及其分子机理。主要研究结果如下:（1）桑叶降糖活性组分-多糖MLPⅡ的分离纯化及分析。采用水提醇沉法从湖桑32号7年生植株的叶片中提取桑叶总多糖,通过DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-100柱层析法纯化得到三个均一多糖组分,分别命名为MLPⅠ,MLPⅡ和MLPⅢ;采用高脂高糖饮食联合小剂量注射STZ的方法制备2型糖尿病大鼠模型,并测定了三个多糖组分对糖尿病大鼠的降血糖作用,结果显示,MLPⅡ的降糖效果最为明显;进一步利用高效体积排阻色谱法、高效液相色谱法和红外光谱法分别测定降糖活性组分MLPⅡ的分子量、单糖组成和基本结构,结果表明,桑叶多糖MLPⅡ为水溶性白色粉末,其分子量为7.93 kDa,主要由甘露糖（man）、鼠李糖（rha）、葡萄糖（glc）、木糖（xyl）和阿拉伯糖（ara）等5种单糖组成,其摩尔比为n（man）:n（rha）:n（glc）:n（xyl）:n（ara）=8.73:1.04:6.53:2.13:1.00,各单糖之间主要由β-糖苷键连接。（2）桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠的治疗作用。采用桑叶多糖MLPⅡ干预治疗2型糖尿病大鼠,分别测定50 mg/kg、100 mg/kg和150 mg/kg剂量的桑叶多糖MLPⅡ对糖尿病大鼠糖脂代谢相关指标及胰岛、肝脏形态的影响,探讨MLPⅡ对2型糖尿病大鼠的治疗作用。结果表明,桑叶多糖MLP Ⅱ可有效控制糖尿病大鼠的体质量和空腹血糖水平,调节糖脂代谢,减轻糖尿病大鼠胰岛β细胞损伤,促进胰岛β细胞分泌胰岛素,改善肝脏脂质代谢和胰岛素抵抗,且MLPⅡ对2型糖尿病大鼠的治疗作用呈现出明显的剂量依赖性。此外,我们还测定了桑叶多糖MLPⅡ对实验大鼠的安全性,结果表明,高剂量的MLPⅡ（1.5 g/kg）对大鼠的肝脏、肾脏生理指标均无任何影响,提示MLPⅡ对大鼠无明显毒副作用。（3）桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠基因表达谱的影响。采用Roche-Nimblegen大鼠全基因组表达谱芯片筛选桑叶多糖MLP Ⅱ干预后糖尿病大鼠胰腺组织和肝脏组织中的差异表达基因。结果表明,与模型对照组相比,150 mg/kg MLPⅡ干预后糖尿病大鼠胰腺组织中上调基因902个,下调基因1293个;对与胰岛细胞功能相关的表达差异基因进行重点筛查分析,发现筛选到的关键差异基因大多属于细胞凋亡相关因子（如Bcl-2家族基因）、氧化应激相关因子（如Tgf-β1基因）、核转录相关因子（如Pdx-1基因）、胰岛素分泌相关因子（如Glut2基因）等。此外,从MLPⅡ干预后糖尿病大鼠肝脏组织中筛选到122个上调基因和138个下调基因;对与胰岛素信号转导相关的表达差异基因进行重点筛查分析,发现各差异基因主要涉及胰岛素受体因子（如Insr基因）、胰岛素受体底物因子（如Irs-2基因）、蛋白络氨酸激酶基因（如Ptp-Ib基因）、丝/苏氨酸蛋白激酶基因（如Akt2基因）及肝糖代谢相关因子（如Gsk-3β基因）等。（4）桑叶多糖MLPⅡ保护2型糖尿病大鼠胰岛β细胞功能的分子基础。在基因芯片检测结果的基础上,采用免疫荧光组化法、western blots法和实时荧光定量PCR法检测桑叶多糖MLPⅡ对糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡相关因子和胰岛素分泌相关因子的影响。结果表明,桑叶多糖MLPⅡ可显着抑制糖尿病大鼠胰岛β细胞中促凋亡因子BAX的表达,提高抑凋亡因子BCL-2的表达,阻断细胞色素C（Cyt-C）从线粒体向胞浆的释放,进而降低胞浆中促凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（CASP-3）的活化水平,从而抑制胰岛β细胞凋亡;此外,桑叶多糖MLPⅡ可通过抑制糖尿病大鼠胰岛β细胞中胰岛素转录相关因子胰腺-十二指肠同源异型盒因子（PDX-1）由胞核到胞浆的转位,提高胞核中PDX-1蛋白表达,促进胰岛素基因的转录,提高下游靶因子葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）和葡萄糖激酶（GCK）的表达,进而促进胰岛素的合成和分泌。（5）桑叶多糖MLPⅡ改善2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素抵抗的分子基础。在基因芯片检测结果的基础上,围绕PI-3K7AKT信号转导通路,通过免疫荧光组化法、western blots法和荧光定量PCR法检测桑叶多糖MLP Ⅱ对糖尿病大鼠肝脏组织中胰岛素信号转导相关因子的影响。结果表明,桑叶多糖MLP Ⅱ可显着抑制糖尿病大鼠肝脏组织中蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP-1B）的表达,提高胰岛素受体底物2（IRS-2）的磷酸化水平和磷脂酰肌醇-3-激酶（PI-3K）、丝/苏氨酸蛋白激酶2（AKT2）、糖原合成激酶-3β（GSK-3β）的表达,进而改善2型糖尿病大鼠的胰岛素信号转导障碍和肝糖代谢,减轻肝脏胰岛素抵抗。本实验系统地研究了 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠的治疗作用,并从组织、蛋白和基因等水平上深入探讨了其具体的作用机制,为进一步开发桑叶多糖MLPⅡ应用于2型糖尿病的防治提供了理论依据。
二、Ca~(2+) signals induced from calcium stores in pancreatic islet β cells（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Ca~(2+) signals induced from calcium stores in pancreatic islet β cells（论文提纲范文）
（1）特异性敲除小鼠胰岛β细胞SNX16对葡萄糖诱导的胰岛素合成与分泌的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩写对照表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 SNXs与胰岛素 |
| 1.3 SNX16 的研究进展 |
| 1.4 葡萄糖介导的胰岛素双时相分泌 |
| 1.5 Ca~(2+)在葡萄糖刺激胰岛素分泌过程中的作用机制 |
| 1.6 研究目的及研究意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验仪器设备 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 试剂配制方法 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 胰岛β细胞特异性敲除SNX16 小鼠的制备 |
| 2.2.2 小鼠基因型鉴定 |
| 2.2.3 小鼠胰岛的分离和纯化 |
| 2.2.4 小鼠葡萄糖耐量实验(GTT) |
| 2.2.5 小鼠胰岛素耐量实验(ITT) |
| 2.2.6 小鼠空腹血糖、餐后血糖、随机血糖测定 |
| 2.2.7 小动物代谢笼实验 |
| 2.2.8 小鼠胰岛瘤细胞系Beta-TC-6 的复苏、培养、传代 |
| 2.2.9 过表达SNX16 胰岛β细胞的制备 |
| 2.2.10 胞浆游离钙水平检测 |
| 2.2.11 ELISA试剂盒(Elabscience)检测小鼠血清胰岛素 |
| 2.2.12 细胞总蛋白提取与BCA法测定总蛋白浓度 |
| 2.2.13 Western blot |
| 2.2.14 实时定量荧光PCR |
| 2.2.15 免疫组织化学 |
| 2.2.16 数据统计与分析 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 胰岛β细胞特异性敲除SNX16 小鼠的基因型鉴定 |
| 3.2 胰岛β细胞特异性敲除SNX16 m RNA以及蛋白水平的验证 |
| 3.3 胰岛β细胞特异性敲除SNX16 对小鼠基础状态没有影响 |
| 3.4 胰岛β细胞特异性敲除SNX16 诱导高糖负荷下小鼠能量代谢改变 |
| 3.5 特异性敲除胰岛β细胞SNX16 损伤小鼠葡萄糖耐量 |
| 3.6 胰岛β细胞特异性敲除SNX16 诱导胰岛素合成与分泌减少 |
| 3.7 过表达SNX16 增强Beta-TC-6 细胞系对葡萄糖刺激后[Ca~(2+)]响应 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 胰岛素的合成与分泌及其调节 |
| 参考文献 |
（2）S1P磷酸酶2调节胰岛β细胞增殖和内质网应激的关键基因筛选及文献计量学分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 S1P磷酸酶2调节胰岛β细胞增殖和内质网应激的关键基因筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 研究方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 差异表达基因的筛选 |
| 2.2 差异表达基因功能分析 |
| 2.3 PPI网络最重要模块分析 |
| 2.4 Hub基因选择和分析 |
| 2.5 基于GTEx和TCGA数据集筛选各组织中CD48基因含量 |
| 3 讨论 |
| 3.1 确定关键基因 |
| 3.2 关键基因与糖尿病 |
| 3.3 关键基因涉及的分子通路 |
| 4 结论 |
| 第二部分 CD48基因研究热点及趋势的文献计量学分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 数据采集 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 年文章发表数量 |
| 2.2 收录文献的基本特征 |
| 2.3 高产出期刊和高被引文章 |
| 2.4 CD48相关文章来源机构分析 |
| 2.5 CD48相关文章作者分析 |
| 2.6 关键词分析 |
| 2.7 关键词出现时间分析 |
| 2.8 关键词时间聚类分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 CD48基因相关研究的发展趋势 |
| 3.2 研究意义 |
| 3.3 优势与局限 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 1-磷酸鞘氨醇对糖尿病血管内皮功能障碍的调节作用及机制 |
| 参考文献 |
| Review S1P Signaling Pathways in Pathogenesis of Type 2 Diabetes |
| References |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（4）新型小分子GLP-1R激动剂S6促进大鼠胰岛素分泌的初步机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 小分子GLP-1R激动剂S6 的筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要药品与试剂 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 主要溶液的配制 |
| 1.4 计算机研究 |
| 1.5 CHO-K1 细胞的培养 |
| 1.6 钙离子荧光检测技术观察化合物对GLP-1R的激动活性 |
| 1.7 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 虚拟筛选和化合物理化性质的计算 |
| 2.2 S6 具有最强的GLP-1R激动作用 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 S6葡萄糖浓度依赖性促进大鼠胰岛素分泌及其电生理机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品与试剂 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 主要溶液的配制方法 |
| 1.5 大鼠胰岛组织的分离与培养 |
| 1.6 大鼠β细胞的分离与培养 |
| 1.7 组织水平上的胰岛素分泌实验 |
| 1.8 全细胞膜片钳实验 |
| 1.9 钙离子成像技术实验 |
| 1.10 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 S6 葡萄糖浓度依赖性的促进胰岛素分泌 |
| 2.2 S6 升高β细胞内的钙离子浓度 |
| 2.3 S6 未影响β细胞电压依赖性钙(VDCC)通道 |
| 2.4 S6 抑制β细胞电压依赖性钾(Kv)通道,延长动作电位时程 |
| 2.5 Kv通道部分参与S6 介导的胰岛素分泌作用 |
| 2.6 细胞内钙库释放参与S6 介导的细胞内的Ca~(2+)浓度升高 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 GLP-1R介导S6 性促进大鼠胰岛素分泌的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品与试剂 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 主要溶液的配制方法 |
| 1.5 大鼠胰岛组织及β细胞的分离与培养 |
| 1.6 CETSA验证GLP-1R与 S6 靶向作用 |
| 1.7 观察GLP-1R对 S6 诱导的胰岛素分泌的影响 |
| 1.8 观察S6 抑制Kv通道电流与GLP-1R的关系 |
| 1.9 观察GLP-1R对 S6 升高细胞内的Ca~(2+)浓度的影响 |
| 1.10 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 pEX3-GLP-1R表达载体的鉴定 |
| 2.2 TOB透析式无细胞表达体系GLP-1R蛋白的鉴定 |
| 2.3 GLP-1R是 S6 的特异性靶标 |
| 2.4 S6 通过GLP-1R促进胰岛素分泌 |
| 2.5 S6 通过GLP-1R增加β细胞内的Ca~(2+)浓度 |
| 2.6 S6 通过GLP-1R抑制Kv通道电流 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）刺槐素对游离脂肪酸诱导的胰岛β细胞损伤的保护机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 文献回顾 |
| 2.1 脂毒性 |
| 2.1.1 FFA与氧化应激 |
| 2.1.2 FFA与ERS |
| 2.1.3 FFA与DM |
| 2.2 内质网应激 |
| 2.2.1 ERS概述 |
| 2.2.2 ERS与凋亡 |
| 2.2.3 ERS与ROS |
| 2.2.4 ERS与DM |
| 2.3 刺槐素的研究进展 |
| 2.3.1 天然黄酮类化合物 |
| 2.3.2 刺槐素 |
| 第三章 实验目的、内容、技术路线 |
| 3.1 实验目的 |
| 3.2 实验内容 |
| 3.3 技术路线 |
| 3.3.1 刺槐素在FFA诱导胰岛损伤中的作用研究 |
| 3.3.2 刺槐素拮抗脂毒性的机制研究 |
| 第四章 材料与方法 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 实验细胞 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要溶液配制 |
| 4.1.4 主要仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞复苏、传代、接种及冻存 |
| 4.2.2 FFA的配制 |
| 4.2.3 刺槐素acacetin配制 |
| 4.2.4 MTT法检测细胞活力 |
| 4.2.5 DC F-DA法检测细胞内ROS的水平 |
| 4.2.6 细胞总RNA提取 |
| 4.2.7 cDNA合成 |
| 4.2.8 XBPls mRNA水平测定 |
| 4.2.9 Real-time PCR检测抗氧化酶mRNA的水平 |
| 4.2.10 总蛋白的提取以及蛋白浓度的测定 |
| 4.2.11 Western blot |
| 4.2.12 CAT酶活检测 |
| 4.2.13 SOD酶活检测 |
| 4.2.14 GPx酶活检测 |
| 4.2.15 流式检测sub-G_1亚二倍体凋亡细胞 |
| 4.2.16 Rhod-2法检测线粒体钙离子的水平 |
| 4.2.17 脂质体转染CHOPsiRNA实验 |
| 4.2.18 统计学分析 |
| 第五章 结果与讨论 |
| 5.1 结果 |
| 5.1.1 FFA对胰岛细胞活力的影响 |
| 5.1.2 刺槐素预处理对FFA损伤胰岛细胞活力的影响 |
| 5.1.3 刺槐素预处理对FFA诱导的细胞内ROS产生的影响 |
| 5.1.4 刺槐素预处理对FFA损伤RINm5F细胞抗氧化酶的影响 |
| 5.1.5 刺槐素预处理对FFA诱导RINm5F细胞凋亡的影响 |
| 5.1.6 刺槐素预处理对FFA诱导钙离子紊乱的影响 |
| 5.1.7 刺槐素预处理对FFA诱导ERS的影响 |
| 5.1.8 siRNA干扰CHOP后对刺槐素预处理保护FFA损伤细胞的影响 |
| 5.2 讨论 |
| 第六章 主要结论与展望 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（6）胞外葡萄糖对INS-1细胞电压门控Na+通道活性的调控作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 胰岛素分泌 |
| 1.3 KATP电导决定了β细胞质膜的兴奋性 |
| 1.4 通过β细胞CaV通道的Ca~(2+)流入主要控制胰岛素分泌 |
| 1.5 KV2.1 通道作为胰岛素分泌的制动器 |
| 1.6 β细胞的各亚细胞区室中发生的离子机制 |
| 1.6.1 KATP,Ca V和 KV通道介导的离子流 |
| 1.6.2 通过瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道的离子流 |
| 1.6.3 诱发β细胞动作电位的未知离子流 |
| 1.6.4 通过肌醇1,4,5-三磷酸受体(inositol1,4,5-trisphosphate receptor,IP3R)离子通道和尼丁受体(ryanodine receptor,Ry R)离子通道从细胞内储库中的Ca~(2+)动员 |
| 1.6.5 ClC-3 Cl-通道介导的Cl-进入胰岛素颗粒 |
| 1.7 胰岛β细胞中的钠通道 |
| 1.7.1 钠通道对胰岛β细胞胰岛素分泌的作用 |
| 1.7.2 钠通道对KATP通道的影响 |
| 1.7.3 钠通道对胞内钙浓度的影响 |
| 1.7.4 钠通道对胰岛β细胞存活率的影响 |
| 1.8 胰岛β细胞钠通道的调节 |
| 1.8.1 葡萄糖调节 |
| 1.8.2 miRNA调节 |
| 1.9 小结与展望 |
| 第2章 胞外葡萄糖对INS-1细胞电压门控Na~+通道活性的调控作用及其机制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试剂与药品 |
| 2.2.2 主要仪器设备 |
| 2.2.3 实验分组及操作方法 |
| 2.2.4 细胞培养 |
| 2.2.5 电生理记录 |
| 2.2.6 胰岛素含量测定 |
| 2.2.7 MTT细胞活力测定 |
| 2.2.8 数据分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 超极化增加INS-1 细胞Na~+电流 |
| 2.3.2 葡萄糖以浓度依赖性方式抑制INa幅度 |
| 2.3.3 葡萄糖对I_(Na)稳态激活曲线的影响 |
| 2.3.4 葡萄糖对I_(Na)稳态失活曲线的影响 |
| 2.3.5 葡萄糖对I_(Na)复活曲线的影响 |
| 2.3.6 葡萄糖对I_(Na)活性依赖性衰减曲线的影响 |
| 2.3.7 葡萄糖对活化通道部分曲线的影响 |
| 2.3.8 TTX和葡萄糖对I_(Na)和胰岛素含量的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果及所获荣誉 |
| 致谢 |
（8）Sidt2基因敲除对小鼠胰岛素分泌及骨骼肌影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词说明 |
| 绪言 |
| 第一部分 Sidt2 基因全身敲除小鼠胰岛素分泌障碍的机制研究 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 骨骼肌特异性敲除Sidt2 基因小鼠骨骼肌的影响研究 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 论文创新点 |
| 致谢 |
| 博士期间发表及撰写论文 |
（9）GLP-1生物学及基于GLP-1的抗糖尿病药物研究（英文）（论文提纲范文）
| 1. Introduction |
| 2. Biology of incretin hormone |
| 2.1. Incretin hormone |
| 2.2. The release of incretin hormone |
| 2.3. The inactivation of GLP-1 |
| 2.4. Properties of DPP-4 |
| 2.5. Physiological activities of GLP-1 |
| 2.6. Incretin hormones in diseases |
| 3. Glucagon receptor family and GLP-1 receptor |
| 3.1. Glucagon receptor family |
| 3.2. GLP-1 receptor and signal transduction |
| 3.3. Expression of GLP-1 receptor |
| 3.4. Polymorphisms of GLP-1 receptor |
| 4. GLP-1 receptor antagonist |
| 4.1. Natural GLP-1 receptor agonists |
| 4.2. Exenatide-derived GLP-1 agonist |
| 4.3. Native GLP-1-based GLP-1 agonist |
| 4.4. Non-peptidyl GLP-1 receptor agonist |
| 5. DPP-4 inhibitor |
| 6. GLP-1 and energy balance |
| 6.1. Central GLP-1 and energy balance |
| 6.2. Peripheral GLP-1 and energy balance |
| 6.3. Modeling GLP-1 physiology |
| 7. The controversies and future of incretin-based therapy |
（10）桑叶多糖MLPⅡ的抗糖尿病作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 糖尿病研究概况 |
| 1.1.1 中国糖尿病流行现状 |
| 1.1.2 糖尿病的分类 |
| 1.1.2.1 1型糖尿病 |
| 1.1.2.2 2型糖尿病 |
| 1.1.2.3 特异型糖尿病 |
| 1.1.2.4 妊娠糖尿病 |
| 1.2 2型糖尿病研究概况 |
| 1.2.1 2型糖尿病发病特征 |
| 1.2.2 胰岛β细胞功能与2型糖尿病 |
| 1.2.2.1 胰岛β细胞功能特征 |
| 1.2.2.2 胰岛β细胞代偿性分泌 |
| 1.2.2.3 胰岛β细胞受损机制 |
| 1.2.2.4 胰岛β细胞凋亡途径 |
| 1.2.2.5 胰岛素分泌通路及相关因子 |
| 1.2.2.6 胰岛β细胞内Ca~(2+)浓度与胰岛素分泌 |
| 1.2.3 胰岛素抵抗与2型糖尿病 |
| 1.2.3.1 胰岛素抵抗概述 |
| 1.2.3.2 胰岛素抵抗的诱因 |
| 1.2.3.3 胰岛素抵抗的分子机制 |
| 1.2.3.4 肝脏胰岛素抵抗 |
| 1.2.4 2型糖尿病动物模型研究进展 |
| 1.2.4.1 自发性2型糖尿病动物模型 |
| 1.2.4.2 转基因2型糖尿病动物模型 |
| 1.2.4.3 诱发型2型糖尿病动物模型 |
| 1.3 基因芯片技术在糖尿病研究中的应用 |
| 1.3.1 基因芯片技术概况 |
| 1.3.2 基因芯片在糖尿病发病机制研究中的应用 |
| 1.3.3 基因芯片在糖尿病治疗药物筛选中的应用 |
| 1.4 糖尿病治疗现状 |
| 1.4.1 饮食疗法 |
| 1.4.1.1 控制饮食 |
| 1.4.1.2 合理安排饮食结构 |
| 1.4.2 运动疗法 |
| 1.4.3 传统药物疗法 |
| 1.4.3.1 磺脲类降糖药物 |
| 1.4.3.2 双胍类降糖药物 |
| 1.4.3.3 α-糖苷酶抑制剂类降糖药物 |
| 1.4.3.4 格列酮类降糖药物 |
| 1.4.4 植物活性组分治疗 |
| 1.4.4.1 多糖 |
| 1.4.4.2 生物碱 |
| 1.4.4.3 皂苷 |
| 1.4.4.4 萜类 |
| 1.4.4.5 黄酮 |
| 1.4.5 桑叶治疗糖尿病研究进展 |
| 1.4.5.1 桑叶的药理功效 |
| 1.4.5.2 桑叶抗糖尿病研究概况 |
| 1.4.5.3 桑叶降糖活性组分-1-脱氧野尻霉素 |
| 1.4.5.4 桑叶降糖活性组分-多糖 |
| 1.5 本研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 桑叶粉 |
| 2.1.2 试验动物与饲料 |
| 2.1.3 试剂及试剂盒 |
| 2.1.4 引物 |
| 2.1.5 主要仪器 |
| 2.1.6 色谱柱 |
| 2.1.7 基因芯片 |
| 2.1.8 溶液及配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 桑叶多糖降糖活性组分的分离纯化及分析 |
| 2.2.1.1 桑叶总多糖的提取 |
| 2.2.1.2 桑叶多糖各组分的分离纯化 |
| 2.2.1.3 桑叶多糖各组分降血糖作用测定 |
| 2.2.1.4 桑叶多糖MLPⅡ组成与结构分析 |
| 2.2.2 桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠的治疗作用 |
| 2.2.2.1 试验设计与分组 |
| 2.2.2.2 糖耐量测定 |
| 2.2.2.3 大鼠血液及组织样品采集 |
| 2.2.2.4 血液相关指标测定 |
| 2.2.2.5 胰岛素敏感指数测定 |
| 2.2.2.6 大鼠肝脏生理指标测定 |
| 2.2.2.7 胰腺组织形态观察 |
| 2.2.2.8 胰岛素表达检测 |
| 2.2.2.9 肝脏组织形态观察 |
| 2.2.2.10 大鼠急性毒性试验 |
| 2.2.3 基因芯片法检测桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠基因表达谱的影响 |
| 2.2.3.1 试验设计 |
| 2.2.3.2 胰腺和肝脏组织RNA提取及检测 |
| 2.2.3.3 cRNA样品合成及标记 |
| 2.2.3.4 芯片杂交 |
| 2.2.3.5 芯片扫描与分析 |
| 2.2.3.6 生物信息学分析 |
| 2.2.4 桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞功能相关因子表达的影响 |
| 2.2.4.1 试验分组及给药 |
| 2.2.4.2 原位末端标记(TUNEL)法检测胰岛β细胞凋亡 |
| 2.2.4.3 胰岛素分泌检测 |
| 2.2.4.4 免疫荧光组化检测 |
| 2.2.4.5 胰岛分离实验 |
| 2.2.4.6 western blots分析 |
| 2.2.4.7 实时荧光定量RT-PCR分析 |
| 2.2.5 桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠胰岛素信号转导相关因子表达的影响 |
| 2.2.5.1 试验设计 |
| 2.2.5.2 免疫荧光组化检测 |
| 2.2.5.3 western blots分析 |
| 2.2.5.4 实时荧光定量RT-PCR分析 |
| 2.2.6 数据处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 桑叶多糖降糖活性组分MLPⅡ的分离纯化及分析 |
| 3.1.1 桑叶多糖的提取纯化 |
| 3.1.2 桑叶多糖各组分对糖尿病大鼠的降血糖效果 |
| 3.1.3 桑叶多糖MLPⅡSephadex G-100柱层析 |
| 3.1.4 桑叶多糖MLPⅡ的分子量测定 |
| 3.1.5 桑叶多糖MLPⅡ的单糖组成 |
| 3.1.6 桑叶多糖MLPⅡ的红外光谱分析 |
| 3.2 桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠的治疗作用 |
| 3.2.1 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠体质量和空腹血糖的影响 |
| 3.2.2 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠糖耐量的影响 |
| 3.2.3 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠糖脂代谢相关指标的影响 |
| 3.2.4 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠胰岛素敏感指数的影响 |
| 3.2.5 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠肝脏脂质系数的影响 |
| 3.2.6 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠肝脏抗氧化能力的影响 |
| 3.2.7 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠肝脏糖代谢功能的影响 |
| 3.2.8 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠胰腺组织形态的影响 |
| 3.2.9 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠胰腺超微结构的影响 |
| 3.2.10 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠胰岛组织中胰岛素表达的影响 |
| 3.2.11 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠肝脏组织形态的影响 |
| 3.2.12 MLPⅡ对2型糖尿病大鼠肝脏超微结构的影响 |
| 3.2.13 毒理试验结果 |
| 3.3 桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠基因表达谱的影响 |
| 3.3.1 RNA质量鉴定 |
| 3.3.2 胰腺基因芯片数据分析 |
| 3.3.2.1 芯片扫描结果及差异基因筛选 |
| 3.3.2.2 基因芯片数据分析 |
| 3.3.2.3 基因芯片结果中胰岛细胞功能相关的表达差异基因统计 |
| 3.3.3 肝脏基因芯片数据分析 |
| 3.3.3.1 芯片扫描结果及差异基因筛选 |
| 3.3.3.2 基因芯片数据分析 |
| 3.3.3.3 基因芯片结果中胰岛素信号转导和肝糖代谢相关的表达差异基因统计 |
| 3.4 桑叶多糖MLPⅡ保护2型糖尿病大鼠胰岛β细胞功能的分子基础 |
| 3.4.1 桑叶多糖MLPⅡ抑制糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的分子基础 |
| 3.4.1.1 TUNEL检测结果 |
| 3.4.1.2 桑叶多糖MLPⅡ对糖尿病大鼠胰岛细胞中Bcl-2和Bax表达的影响 |
| 3.4.1.3 桑叶多糖MLPⅡ对糖尿病大鼠胰岛细胞Cyt-C线粒体释放情况的影响 |
| 3.4.1.4 桑叶多糖MLPⅡ对糖尿病大鼠胰岛细胞中Caspase-3表达的影响 |
| 3.4.2 桑叶多糖MLPⅡ促进2型糖尿病大鼠胰岛β细胞分泌胰岛素的分子基础 |
| 3.4.2.1 血清胰岛素含量 |
| 3.4.2.2 胰岛素免疫荧光检测结果 |
| 3.4.2.3 胰岛β细胞超微结构观察结果 |
| 3.4.2.4 桑叶多糖MLPⅡ对糖尿病大鼠胰岛细胞中PDX-1蛋白转位及表达的影响 |
| 3.4.2.5 桑叶多糖MLPⅡ对糖尿病大鼠胰岛细胞中GCK和GLUT2表达的影响 |
| 3.5 桑叶多糖MLPⅡ改善2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素抵抗的分子基础 |
| 3.5.1 桑叶多糖MLPⅡ对糖尿病大鼠肝脏细胞中PTP-1B和IRS-2表达的影响 |
| 3.5.2 桑叶多糖MLPⅡ对糖尿病大鼠肝脏细胞中PI-3K和AKT2表达的影响 |
| 3.5.3 桑叶多糖MLPⅡ对糖尿病大鼠肝脏细胞中GSK-3β表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 桑叶多糖降糖活性组分MLPⅡ的分离纯化及分析 |
| 4.2 桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠的降血糖作用 |
| 4.3 桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素抵抗的改善作用 |
| 4.4 桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠基因表达谱的影响 |
| 4.5 桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞功能的影响 |
| 4.6 桑叶多糖MLPⅡ对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素信号转导的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文、专利及获奖情况 |
四、Ca~(2+) signals induced from calcium stores in pancreatic islet β cells（论文参考文献）
- [1]特异性敲除小鼠胰岛β细胞SNX16对葡萄糖诱导的胰岛素合成与分泌的影响[D]. 向佳佳. 南昌大学, 2021(01)
- [2]S1P磷酸酶2调节胰岛β细胞增殖和内质网应激的关键基因筛选及文献计量学分析[D]. 贺琼. 山西医科大学, 2021(01)
- [3]Vascular endothelial growth factor B inhibits insulin secretion in MIN6 cells and reduces Ca2+ and cyclic adenosine monophosphate levels through PI3K/AKT pathway[J]. Jing-Dan Jia,Xu Luo,Rong-Rong Li,Ya-Na Li,Wen-Guo Jiang,Geng Tian,Yu-Chi Zhao. World Journal of Diabetes, 2021(04)
- [4]新型小分子GLP-1R激动剂S6促进大鼠胰岛素分泌的初步机制研究[D]. 杨晓华. 山西医科大学, 2020
- [5]刺槐素对游离脂肪酸诱导的胰岛β细胞损伤的保护机制研究[D]. 石洁. 江苏大学, 2020(03)
- [6]胞外葡萄糖对INS-1细胞电压门控Na+通道活性的调控作用及其机制研究[D]. 陈冲. 江西科技师范大学, 2018
- [7]Life after the birth of the mitochondrial Na+/Ca2+ exchanger,NCLX[J]. NITA Lulia I.,HERSHFINKEL Michal,SEKLER Israel. Science China（Life Sciences）, 2015(01)
- [8]Sidt2基因敲除对小鼠胰岛素分泌及骨骼肌影响研究[D]. 常国营. 上海交通大学, 2014
- [9]GLP-1生物学及基于GLP-1的抗糖尿病药物研究（英文）[J]. 易凡,李栋,马伟志,杜权. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 2013(01)
- [10]桑叶多糖MLPⅡ的抗糖尿病作用及其机制研究[D]. 路国兵. 山东农业大学, 2012(01)