论文摘要
我国是世界上畜禽种质资源最丰害的国家之一。近些年由于高产专门化品种的培育与推广,导致很多畜禽品种受到一定程度的威胁。因此保护动物遗传资源迫在眉睫。本论文选取了青海贵德裘皮羊,内蒙古乌珠穆沁,陕西同羊为研究对象,采用组织块贴壁培养法和细胞冷冻技术成功构建了成纤维细胞系,并对培养细胞进行了形态学、生长动力学观察、细胞活力测定、核型分析和微生物检测。该细胞系的建立,使得这三个国家重要种质资源在细胞水平上保存下来,也为体细胞克隆等研究提供了理想的生物材料。每个品种的冻存样本含量为40-50之间,每个品种的冻存管数在240-300支之间,每个个体的冻存管数为6支,每支冻存管的细胞数量为3-5×106个/ml。与此同时研究了EGF,IGF-1对绵羊卵母细胞体外成熟和卵裂的影响,半胱氨酸和不同胚胎培养液对体外受精胚胎早期发育的影响,为体外胚胎冷冻保存提供优质高效的胚胎。结果表明:Ⅰ绵羊耳成纤维细胞系的建立1细胞形态为典型的成纤维型细胞,绝大部分呈梭形或不规则三角形,细胞生长时呈放射状、火焰状走势,细胞增殖快,生长旺盛。细胞生长曲线显示复苏细胞生长状况很好,三个绵羊品种生长曲线均呈“S”型,每代细胞生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期,符合体外细胞生长规律。2细胞冻存前后存活率计算结果表明,冻存前细胞活力为96.2%以上,以DMEM/F-12+20%FBS中添加10%DMSO冻存成纤维细胞,解冻后细胞活力为93.6%以上,24h后的贴壁率平均为85%。传代后生长状况与冻存前基本一致,细胞形态和生长速度没有明显变化,冻存细胞生物学特征稳定。3微生物污染检测呈阴性,表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染,冻存细胞为健康单一的成纤维细胞。4在传代10次之前,细胞染色体中二倍体（2n=54）占主体,约为96-98%之间,为稳定的二倍体细胞系。ⅡEGF ,IGF-1对绵羊卵母细胞体外成熟及不同培养液对体外培养胚胎发育效果影响的研究1 EGF对卵母细胞体外成熟和卵裂的影响,EGF浓度为50ng/ml时成熟率和卵裂率为71.2%,45.5%,显著高于对照组和10ng/ml,20ng/ml,30ng/ml,40ng/ml组,差异显著（P<0.05） ,当EGF浓度达到100ng/ml时,成熟率和卵裂率最高,分别为72.9%和45.7%。2 IGF-1对卵母细胞体外成熟和卵裂的影响,IGF-1浓度为40ng/ml时成熟率和卵裂率分别为70.7%,58.5%,显著高于对照组和浓度为10ng/ml,20ng/ml,60ng/ml,80ng/ml,100ng/ml组,差异显著（P<0.05） ,当IGF-I的浓度为100ng/ml时,成熟率和卵裂率最低,分别为38.8%和20.0%,与对照组和其它各实验组差异显著（P<0.05）;3 EGF和IGF-1联合对对卵母细胞体外成熟和卵裂的影响,50ng/ml EGF和40ng/ml IGF-1联合使用,成熟率和卵裂率分别为85.6%和61.0%,同对照组和单独运用50ng/ml EGF,40ng/ml IGF-1组之间差异显著（P<0.05）。4在mSOFaa液+10%FCS中添加100umol/L半胱氨酸其桑囊胚率为32.7%,高于对照组、50umol/L组和200umol/L组,差异显著（P<0.05）, 50umol/L组和200umol/L组无显著差异（P>0.05）。5在胚胎培养液mSOFaa液+3mg/mL BSA和胚胎培养液mSOFaa液+10%ESS的卵裂率分别为61.2%,和62.5%,差异不显著（P>0.05）,桑囊率分别为13.5%和30.0%,差异显著（P<0.05）,表明在培养绵羊胚胎时BSA不如ESS的培养效果好。
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标签：绵羊论文; 成纤维细胞系论文; 卵母细胞论文; 体外成熟论文; 体外受精论文; 表皮生长因子论文; 胰岛素生长因子论文;