血清酶及同工酶检测应用于有机磷中毒诊断的研究

论文摘要

本研究以三黄鸡作为实验动物模型,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离了健康的以及急、慢性有机磷农药（氧乐果）中毒的鸡血清CHE和LDH同工酶,并结合血清酶活性的检测结果,综合判断分析有机磷中毒对机体的影响。 结果表明:鸡急性氧乐果染毒1h后,血清CHE的活性迅速降低;24h后有所恢复。活性降低的程度以及中毒症状与染毒剂量成正比,呈现剂量效应的关系。血清LDH活性出现些许的上升,血清ALP、AST以及ALT的活性变化不明显。慢性氧乐果染毒30d期间,血清CHE的活性先下降后升高,而血清LDH活性则先升高后降低,但是都没有恢复到正常水平。血清ALP、AST以及ALT的活性变化不明显。因此,血清CHE是有机磷中毒的标志性酶类。应用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行同工酶检测发现,健康的三黄鸡SCHE和SLDH都出现了5条区带。急慢性氧乐果染毒的鸡,同工酶检测发现SCHE出现了活性带FMB、SCHE1′且SCHE4的染色加深,慢性染毒的后期活性酶带有所减少,但是仍保持较高的水平。SLDH的同工酶检测则发现急性以及慢性染毒的前期、中期和后期SLDH同工酶当中SLDH4和SLDH5融合成了一条酶带。通过对同一个动物的血清样品,在保存期内的不同时间段进行SCHE和SLDH同工酶的检测发现,冷冻保存15d左右的血清,同工酶的活性与新鲜血清同工酶的活性比较没有发生改变,因此使用冷冻的办法保存血清,在15d以内不会影响同工酶检测的结果。 本研究利用同工酶电泳技术成功分离健康以及有机磷中毒的三黄鸡SCHE和SLDH同工酶,结合血清酶活性测定的结果,综合判断分析,对于提高有机磷中毒的诊断治疗以及预后的准确性具有重大的意义,为有机磷中毒的研究提供了一个新的研究平台。

论文目录

• 前言
• 1 有机磷农药中毒的研究进展
• 1.1 农药的种类
• 1.2 有机磷中毒的机制及慢性毒作用研究进展
• 2 血清酶活性检测的应用
• 3 同工酶的应用进展
• 4 本研究的目的和意义
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要实验仪器及耗材
• 2 方法
• 2.1 器皿的处理
• 2.2 试剂的配制
• 2.3 血清酶活性的测定
• 2.4 有机磷农药中毒症状以及剖检病变的观察
• 2.5 胆碱酯酶同工酶的检测
• 2.6 乳酸脱氢酶同工酶的检测
• 2.7 血清同工酶稳定性及重复性检测
• 结果与分析
• 1 血清酶活性测定结果
• 1.1 急性氧乐果染毒血清酶活性测定结果
• 1.2 小剂量慢性氧乐果染毒血清酶活性测定结果
• 2 氧乐果中毒症状及剖检病变
• 2.1 急性实验组氧乐果中毒症状及剖检病变
• 2.2 小剂量慢性实验组氧乐果中毒症状及剖检病变
• 2.3 小剂量慢性氧乐果染毒动物体重增长情况
• 3 血清胆碱酯酶同工酶测定结果
• 3.1 对照组血清胆碱酯酶同工酶的检测结果
• 3.2 急性组血清胆碱酯酶同工酶的检测结果
• 3.3 慢性组血清胆碱酯酶同工酶的检测结果
• 4 血清乳酸脱氢酶同工酶测定结果
• 4.1 对照组血清乳酸脱氢酶同工酶的检测结果
• 4.2 急性组血清乳酸脱氢酶同工酶的检测结果
• 4.3 慢性组血清乳酸脱氢酶同工酶的检测结果
• 5 血清同工酶稳定性及重复性检测的结果
• 讨论
• 1 血清酶活性检测
• 2 氧乐果染毒症状
• 3 同工酶技术应用于有机磷农药中毒研究的可行性
• 4 同工酶分离方法的讨论
• 5 同工酶检测结果讨论
• 结论
• 参考文献
• 缩略词
• 致谢
• 作者简历