论文题目: 周期性牵拉应力下三维培养的成骨样细胞的生物力学效应及其机制的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 王鹏程
导师: 张英泽
关键词: 生物机械应力,三维细胞培养,碱性磷酸酶,骨桥蛋白,人骨髓间充质干细胞,转移生长因子
文献来源: 河北医科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 1 成骨样细胞的三维培养及牵拉应力下形态学改变目的:研究克隆的鼠颅骨成骨样细胞(colonal murine osteoblast-like cell line MC3T3-E1)三维培养方法及在特定的周期性牵拉应力刺激下形态学改变。骨组织工程的关键在于创建类似活体生理环境的细胞体外培养体系。以往的体外细胞培养为单层、即二维细胞培养,这与细胞在活体的生存环境有很大差异。目前,建立三维细胞培养体系是骨组织工程的研究热点,不同的组织细胞对三维结构载体的要求条件存在差异。本实验选择克隆的鼠颅骨成骨样细胞作为种子细胞,创建三维结构培养体系,研究细胞培养过程中的细胞演变,并进一步在动力条件下观察细胞的形态学改变,为进一步探讨成骨细胞受到机械牵拉应力刺激后的分子生物学效应及信号传导机制奠定基础,从而指导临床中骨折的治疗。方法: 以明胶海绵(2cmx2cmx0.25cm)作为MC3T3-E1 的三维培养支架,明胶海绵来源于纯化的猪皮肤胶原蛋白(Gelfoam; Upjohn, Kalamazoo, MI), 每块明胶海绵种植细胞悬液100μl,细胞数目为1.25×10~5个。生物牵拉装置(Bio-Stretch System; ICCT Technologies, Inc., Canada)包括一个程序控制的脉冲计时器、控制器、双向调节直流电源和一套带有平台的螺线电导管。放有明胶海绵的培养皿置于每一个电导管的前方。明胶海绵的一端固定于皿底,另一端用塑料夹包裹一个金属棒。供电后通过线圈的电流产生磁场,吸引金属棒朝线圈方向移动,拉伸明胶海绵。断电后,明胶海绵回缩为原来的长度。胶原海绵拉伸度为5%、作用频率为60cycles/min、作用时间为15min/h。牵拉后2d、4d、6d、8d、10d 分别从牵拉组和对照组中各取3 个样本,行细胞计数。将对照组和牵拉组各时相的每快明胶海绵均匀切成四份,布安氏液(Bouin’s fluid)固定48h,然后按以下程序制作切片:脱水、石蜡包埋:石蜡切片为6μm;脱蜡、苏木精伊红染色。HE 染色光镜下观察其形态学改变。所得数据采用SAS6.12统计软件进行两样本t 检验。
论文目录:
中文摘要
英文摘要
英文缩写
研究论文 周期性牵拉应力下三维培养的成骨样细胞的生物力学效应及其机制的研究
引言
第一部分 成骨样细胞的三维培养及牵拉应力下形态学改变
前言
材料与方法
结果
附图
附表
讨论
小结
参考文献
第二部分 牵拉应力对三维培养的成骨样细胞的生物学效应
前言
材料与方法
结果
附图
附表
讨论
小结
参考文献
第三部分 TGF-β1 基因体外转染的人骨髓间充质干细胞的定向分化的研究
前言
材料与方法
结果
附图
附表
讨论
小结
参考文献
综述一 细胞外基质蛋白的新家族—matrilins 的研究进展
综述二 机械应力刺激对骨髓间充质干细胞分化的影响研究进展
综述三 基因治疗在骨诱导过程中的应用
致谢
个人简历
发布时间: 2005-06-21
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标签：生物机械应力论文; 三维细胞培养论文; 碱性磷酸酶论文; 骨桥蛋白论文; 人骨髓间充质干细胞论文; 转移生长因子论文;