人脐血单个核细胞分离、培养方法的比较

论文摘要

目的:采用不同的分离、培养条件,以筛选出一种相对较好的脐血单个核细胞（mononuclear cells ,MNCs）分离、培养方法。方法:取2007-5/2008-2新疆医科大学第一附属医院产科健康产妇的脐血,比较不同分离方法所得脐血MNCs数及随后的细胞形态学变化,比较不同换液时间、不同培养基、不同浓度的胎牛血清对脐血MNCs原代培养及传代过程的影响,在原代培养第30天通过流式细胞仪检测细胞表面免疫表型。结果:3种分离方法在分离脐血MNCs数方面差异具有统计学意义（P<0.01）,其中以羟乙基淀粉沉淀法得到的MNCs数量最多（15.23±4.30）×106/mL,密度梯度离心法、CD133免疫磁珠组所获MNCs数分别为（3.71±1.14）×106/mL、（0.066±0.027）×106/mL。但羟乙基淀粉沉淀法所得细胞生长状态欠佳。首次第5天～7天换液、低糖DMEM、IMDM培养基有利于MNCs的生长。还不能认为30%胎牛血清与20%胎牛血清的培养基在培养脐血MNCs方面有差别。流式检测密度梯度离心法、CD133免疫磁珠组CD34阳性率分别为10.1%、0.5%。结论:羟乙基淀粉沉淀法是一种高效的脐血分离方法,但其所得细胞的生长状态欠佳,需进一步实验证实。CD133免疫磁珠法所获细胞纯度高,可根据不同要求选用相应分离法。首次第5天～7天换液、低糖DMEM、IMDM培养基是相对较好的MNCs培养条件。30%胎牛血清与20%胎牛血清的培养基在培养脐血MNCs方面尚未发现差别。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 内容与方法
• 1. 材料
• 1.1 标本来源
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要设备
• 1.4 实验准备
• 2. 实验方法
• 2.1 脐带血收集
• 2.2 不同培养条件下脐血单个核细胞的实验观察及形态学改变
• 2.3 三种分离方法分离脐血单个核细胞的比较及不同浓度胎牛血清的比较
• 2.4 传代培养
• 2.5 脐血单个核细胞的CD34 免疫表型检测
• 2.6 技术路线
• 2.7 主要观察指标
• 2.8 质量控制
• 2.9 统计学分析
• 结果
• 讨论
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 导师评阅表