人Toll样受体-9的表达及其抗体制备

论文摘要

Toll样受体（Toll like receptors TLRs）是哺乳动物具备的天然免疫分子,属于模式识别受体（pattern recognition receptor PRR）,在识别和抵御各种病原微生物感染中发挥着着重要作用。1997年以来,在哺乳动物体内相继发现了13种Toll样受体（TLR1-TLR13）,人体内目前发现有10种Toll样受体（hTLR1-hTLR10）,皆属于工型跨膜受体。TLR-9是典型的Toll家族成员,细菌DNA中含有的CpG序列是TLR-9目前唯一明确识别的病原相关分子模式（pathogen associated molecular patterns PAMPs）。CpG序列即以非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸（CpG）为核心的回文序列,该序列在脊椎动物基因组的出现频率大大低于在原核生物、病毒基因组的出现频率,且CG多发生甲基化。脊椎动物免疫系统正是通过识别CpG特征结构来识别微生物DNA并产生针对抗原的保护性免疫反应。目前关于CpG序列如何在抗过敏反应,抗肿瘤反应中,抗自身免疫反应中发挥作用已成为基础及临床医学研究中的热点。作为CpG序列在体内的唯一受体,自发现以来也受到了研究者的关注。 尽管许多实验已证实TLR-9可以介导CpG激活多种免疫细胞,但是关于TLR-9蛋白的特征,如何与CpG结合并介导后续免疫反应目前仍有许多未知需要进一步研究。本研究拟对人TLR-9（hTLR-9）进行克隆、表达并制备其相关的多克隆抗体。同时构建转染有hTLR-9基因的HEK293细胞模型,这也达到了对hTLR-9进行真核表达的目的。在此基础上,拟利用转染的细胞作为免疫原,以原核表达的hTLR-9 N-末端作为筛选抗原,制备相应的抗hTLR-9 N—末端的单克隆抗体。本实验结果获得了抗hTLR-2单、多克隆抗体,构建成功稳定转染有hTLR-9基因的HEK293细胞模型,为进一步研究hTLR-9-CpG系统提供了重要的制剂。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 人TLR-9基因的克隆及其表达
• 1.1 hTLR-9基因的克隆
• 1.1.1 材料
• 1.1.2 方法
• 1.1.3 结果
• 1.2 hTLR-9基因的获取及鉴定
• 1.2.1 材料
• 1.2.2 方法
• 1.2.3 结果
• 1.3 hTLR-9在大肠杆菌中的表达
• 1.3.1 材料
• 1.3.2 方法
• 1.3.3 结果
• 1.4 hTLR-9在人胚肾293细胞（HEK293）的表达
• 1.4.1 材料
• 1.4.2 方法
• 1.4.3 结果
• 1.5 讨论
• 1.6 小结
• 第二章 抗人TLR-9 N-末端抗体的制备与鉴定
• 2.1 抗人TLR-9 N-末端多克隆抗体的制备与鉴定
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.1.3 结果
• 2.2 抗人TLR-9 N-末端单克隆抗体的制备与鉴定
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 方法
• 2.2.3 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 全文总结
• 参考文献
• 缩略词表
• hTLR-9蛋白的B细胞抗原表位分析
• 综述：TOll样受体-9研究进展
• 成果
• 致谢
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