禽传染性支气管炎病毒S2和E基因的克隆及序列分析

论文摘要

本研究采用RT-PCR对3株四川分离株IBV进行了S2、E基因的扩增,并对3株IBV进行了S2、E基因的序列分析。采用SDS-Pro.K法抽提M41标准株及本课题组分离的IBV基因组RNA。根据Genbank公布的禽传染性支气管炎病毒呼吸型标准毒株IBV M41基因组全序列设计了扩增S2、E基因的两对引物。用S2基因的引物对4株IBV M41、SAIBWS、SAIB4、SAIBWJ进行了RT-PCR扩增,均获得了长约1.5 kb特异条带（注示:本研究所扩S2基因为部分S2基因）。用E基因的引物对4株IBV M41、SAIBWS、SAIB4、SAIBWJ进行了RT-PCR扩增,均获得了长约400bp特异条带。 将SAIBWS、SAIB4、SAIBWJ三株的RT-PCR特异扩增条带插入到PMD18-T质粒多克隆位点,构建了含目的基因片段的克隆质粒,转化JM109载体菌,筛选获得S2、E基因阳性克隆菌株。对S2基因的克隆质粒的外源片段序列测定表明,该片段含有IBV S2基因序列,其基因长约1437bp,编码约479个氨基酸。对E基因的克隆质粒的外源片段序列测定表明,该片段含有IBV E基因全序列,其基因全长约330bp,编码约110个氨基酸。 与Genbank公布的IBV M41标准株S2基因相比,SAIBWS、SAIB4、SAIBWJS2基因核苷酸序列同源率分别为85.5%、84.4%、84.4%,相应的氨基酸序列同源率分别为86.8%、88.7%、81.6%。与Genbank公布的IBV M41标准株E基因相比,SAIBWS、SAIB4、SAIBWJE基因核苷酸序列同源率均为88.8%,相应的氨基酸序列同源率均为87.3%。 本研究丰富了IBV分子流行病学资料,对有效指导IB针对性防疫提供了科学依据,为IB DNA疫苗的研制提供了基础材料。

论文目录

• 1. 前言
• 1.1 禽传染性支气管炎概述
• 1.2 IBV分子生物学的国内外研究进展
• 1.3 IBV S2、E基因克隆测序的国内外研究进展
• 1.4 本研究的前期工作基础
• 2. 本研究的目的意义
• 3. 材料及仪器
• 4. 方法
• 4.1 IBV RNA的提取
• 4.2 IBV S2、E基因的RT-PCR扩增
• 4.3 IBV S2、E基因的克隆
• 4.4 IBV S2、E基因的序列测定
• 5. 结果
• 5.1 IBV S2、E基因的RT-PCR结果
• 5.2 IBV S2基因的RT-PCR克隆结果
• 5.3 IBV S2、E基因序列及氨基酸序列比较
• 5.4 IBV S2、E基因核苷酸序列的比较分析和系统进化树分析
• 6. 讨论
• 6.1 IBV S2、E基因的RT-PCR
• 6.2 IBV S2、E基因的克隆
• 6.3 IBV S2、E基因的变异性
• 6.4 IBV S2、E基因的应用前景
• 7. 结论
• 参考文献
• 致谢