人参仿生化提取分离及初步药效学研究

论文摘要

目的:以人参为例,探讨中药仿生化提取法研究的意义及可行性,并构建仿生化提取研究的技术平台。方法:主要对人参超微粉和普通粉的化学性质、理化鉴别、薄层定性鉴别及含量测定进行对比研究;采用单因素及正交试验对人参超微粉的仿生化提取工艺及纯化工艺进行优化;并初步建立提取物的质量标准;采用溶血及最大给药量试验,以验证人参超微粉仿生化提取物的用药安全性;提取物有效性筛选和确定是采用小鼠负重游泳试验、爬杆试验、耐缺氧试验考察人参超微粉仿生化提取物的抗疲劳及耐缺氧能力;以细胞存活率为评价指标,采用MTT方法评估人参超微粉仿生化提取物对细胞紫外线照射后的修复损伤能力,以确定人参超微粉仿生化提取物的抗辐射作用。结果:人参超微粉及普通粉对比研究试验结果表明,超微粉经外观性状分析,粉末颗粒均匀,电镜下观察植物细胞破壁较完全;薄层定性鉴别及含量测定结果均表明总皂苷溶出率明显提高;通过单因素及正交试验的考察,确定最佳工艺条件为:仿生溶媒pH值为2.0,固液比为1:25,控制温度37℃,提取60min;通过静态吸附法及析因试验设计法,确定最佳分离纯化工艺为:取浓度为0.4g/ml（相当于生药量）的样品液（pH=7）上样,预吸附3h,5BV水洗脱,再用3BV 50%乙醇以2BV/h的流速进行洗脱,得到组成明确的提取物;人参超微粉仿生化提取物有溶血作用,在规定剂量范围内用药安全;该提取物与同剂量人参水液提取物相比,可显著延长小鼠负重游泳、爬杆及耐缺氧的持续时间,且各给药组与对照组比较均有显著差异;还可显著提高RSa细胞存活率,且各给药组与未给药组比较均有显著差异,RSa细胞存活率与给药浓度呈正相关。结论:人参经超微粉碎后,细胞破壁率高,有效成份可直接释放,故可提高溶出率;经仿生化提取后,得到更易于人体吸收的有效成分;D-101型大孔树脂可有效分离仿生化提取液,得到组成明确的人参三醇皂苷提取物,且工艺简便成本低,适合工业化生产;人参超微粉仿生化提取物具有较明显的抗疲劳及耐缺氧作用,其起效快,提高了生物利用度,且对紫外线照射引起的细胞凋亡有抑制作用。提取物的安全性和有效性研究证明了此方法的可行性,为人参化学成分的开发提供依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略语
• 前言
• 文献综述
• 1 古籍文献概述
• 2 种类与资源分布
• 3 化学成分与药理作用
• 4 人参单体皂苷的药物动力学研究
• 5 提取方法
• 6 分离纯化方法
• 7 有效成分分析方法
• 8 问题提出及课题设计
• 实验研究
• 1 实验材料与仪器
• 1.1 药材
• 1.2 试药与试剂
• 1.3 仪器与设备
• 1.4 粉体的制备
• 1.5 实验动物
• 1.6 细胞株
• 1.7 统计学方法
• 2 实验方法
• 2.1 人参超微粉与普通粉质量对比研究
• 2.1.1 人参超微粉与普通粉化学性质对比研究
• 2.1.2 人参超微粉与普通粉TLC 定性对比研究
• 2.1.3 人参超微粉与普通粉定量对比研究
• 2.1.4 小结
• 2.2 人参超微粉仿生化提取及纯化工艺研究
• 2.2.1 人参超微粉仿生化提取工艺研究
• 2.2.2 人参超微粉仿生化提取纯化工艺研究
• 2.2.3 小结
• 2.2.4 人参超微粉仿生化提取纯化工艺流程
• 2.3 人参超微粉仿生提取物质量标准研究
• 2.3.1 人参超微粉仿生化提取物质量标准制订
• 2.3.2 人参超微粉仿生化提取物质量标准起草说明
• 2.3.3 小结
• 2.4 人参超微粉仿生化提取物安全性研究
• 2.4.1 人参超微粉仿生化提取物溶血试验研究
• 2.4.2 人参超微粉仿生化提取物急性毒性试验研究
• 2.5 人参超微粉仿生化提取物初步药效学研究
• 2.5.1 人参超微粉仿生化提取物抗疲劳作用研究
• 2.5.2 人参超微粉仿生化提取物耐缺氧作用研究
• 2.5.3 人参超微粉仿生化提取物抗辐射作用研究
• 2.6 中药用仿生化提取研究的基本模式
• 讨论
• 1 人参超微粉与普通粉质量对比研究
• 2 人参超微粉仿生化提取及纯化工艺研究
• 3 人参超微粉仿生化提取物质量标准研究
• 4 人参超微粉仿生化提取物用药安全性研究
• 5 人参超微粉仿生化提取物初步药效学研究
• 结语
• 致谢
• 参考文献
• 附图