菜芙蓉中黄酮的提取及检测方法的研究

菜芙蓉中黄酮的提取及检测方法的研究

论文摘要

菜芙蓉的花、茎、叶、种子中,都含有丰富的生物活性物质,本文主要对菜芙蓉种子、花以及茎中黄酮提取方法进行了研究并开发出了两种荧光分析方法和一种高效液相色谱分析方法,从而对菜芙蓉中黄酮的单体芦丁和槲皮素的含量进行了检测。本文主要以菜芙蓉的种子、花、茎为原料,采用传统的乙醇浸提法,提取菜芙蓉中的总黄酮;并以芦丁为对照品制作标准曲线,运用硝酸铝比色法测定总黄酮的含量。通过单因素试验方法,确定乙醇浓度、浸提时间、浸提温度、液料比四种因素的提取条件;根据二次回归正交旋转组合设计原理,在单因素试验的基础上采用四因素五水平的响应曲面分析方法进行试验设计;同时通过响应曲面的回归分析方法,将因子(乙醇浓度、浸提时间、浸提温度、液料比)与响应值(提取率)的相互关系用多项式拟合,把因子和响应值的关系函数化,通过对函数的面进行分析,研究因子与响应值之间、因子与因子之间的相互关系,并进行优化,从而获得最优的工艺参数,提高了菜芙蓉样品中黄酮的提取率。最终利用模型的响应曲面图及其等高线图,得到的优化工艺参数为:乙醇浓度为53.9%、浸提时间为2.2h、浸提温度为76.9℃、液料比为22.3mL·g-1时提取效果最佳,黄酮提取率高达3.6%。鉴于植物体内含有丰富的芦丁和槲皮素物质,尤其这两种化合物在生物、医学领域的广泛运用,本文根据芦丁和槲皮素中特有的烯醇式的羟基或羧基结构能与金属离子形成π键共扼体系,形成具有灵敏度高、检测限低的具有很强的荧光性化合物的性质,分别研究了芦丁-铁氰化钾-硼砂体系和槲皮素-Al3+体系荧光光度法进行测定菜芙蓉中的芦丁或槲皮素的含量,分析各体系的荧光性质及影响因素,通过各体系的精密度和回收率试验,开发了关于菜芙蓉中的芦丁和槲皮素的荧光检测技术。为了进一步更准确地进行定性定量分析菜芙蓉中黄酮类物质,本文最后研究并开发了以芦丁和槲皮素为标准物,采用C18反相色谱柱,二极管阵列检测器高效液相色谱法分离分析菜芙蓉中的芦丁和槲皮素的色谱分析方法,检测结果进一步说明菜芙蓉中确实含有丰富的黄酮类物质,该资源值得开发和推广。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 绪论
  • 1.1 菜芙蓉简介
  • 1.1.1 形态特征
  • 1.1.2 生物营养价值
  • 1.1.3 黄酮开发研究
  • 1.2 黄酮类化合物概述
  • 1.2.1 黄酮类化合物的分布
  • 1.2.2 黄酮类化合物的结构和分类
  • 1.2.3 黄酮类化合物的性质
  • 1.2.3.1 性状
  • 1.2.3.2 溶解性
  • 1.2.3.3 酸碱性
  • 1.2.3.4 显色反应
  • 1.2.3.5 金属盐类试剂的螯合反应
  • 1.2.4 黄酮类化合物的提取
  • 1.2.4.1 水提法
  • 1.2.4.2 有机溶剂提取法
  • 1.2.4.3 碱提取酸沉淀法
  • 1.2.4.4 酶法
  • 1.2.4.5 超临界流体萃取法
  • 1.2.4.6 超声波提取法
  • 1.2.4.7 微波提取法
  • 1.2.4.8 半仿生提取技术
  • 1.2.5 黄酮类化合物的定性定量检测
  • 1.2.5.1 紫外分光光度法
  • 1.2.5.2 络合-分光光度法
  • 1.2.5.3 荧光光度法
  • 1.2.5.4 平面色谱法
  • 1.2.5.5 高效液相色谱法
  • 1.2.5.6 气相色谱法
  • 1.2.5.7 超临界流体色谱法
  • 1.2.5.8 高效毛细管电泳法
  • 1.2.5.9 极谱法
  • 1.2.5.10 色谱-质谱联用法
  • 1.2.6 芦丁简介
  • 1.2.6.1 芦丁的结构及特性
  • 1.2.6.2 芦丁的药理作用及临床应用
  • 1.2.7 槲皮素简介
  • 1.2.7.1 槲皮素的结构和特性
  • 1.2.7.2 槲皮素的药理作用及临床应用
  • 1.3 荧光方面的基本理论
  • 1.3.1 荧光过程
  • 1.3.2 荧光产生的必要条件
  • 1.3.3 有机化合物的结构与荧光的关系
  • 1.4 本实验的主要研究内容
  • 第二章 响应曲面法优化菜芙蓉的黄酮的提取工艺
  • 2.1 引言
  • 2.2 仪器与试剂
  • 2.2.1 仪器
  • 2.2.2 试剂
  • 2.3 实验部分
  • 2.3.1 原料预处理
  • 2.3.2 菜芙蓉中粗脂肪的提取
  • 2.3.2.1 提取流程
  • 2.3.2.2 粗脂肪含量计算
  • 2.3.3 菜芙蓉中的黄酮的提取方法
  • 2.3.3.1 提取工艺
  • 2.3.3.2 提取步骤
  • 2.3.4 菜芙蓉中黄酮的测定方法
  • 2.3.4.1 测定方法原理
  • 2.3.4.2 芦丁吸收波长的选择
  • 2.3.4.3 芦丁标准曲线的绘制
  • 2.3.4.4 提取液中黄酮的测定
  • 2.3.4.5 菜芙蓉中黄酮提取率的计算
  • 2.3.5 单因素实验
  • 2.4 结果与讨论
  • 2.4.1 菜芙蓉中粗脂肪的含量
  • 2.4.2 芦丁标准工作曲线
  • 2.4.3 单因素实验
  • 2.4.3.1 乙醇浓度(X1)的选择
  • 2.4.3.2 浸提时间(X2)的选择
  • 2.4.3.3 浸提温度(X3)的选择
  • 2.4.3.4 液料比(X4)的选择
  • 2.4.4 响应曲线法优化菜芙蓉中黄酮的提取工艺
  • 2.4.4.1 响应曲面分析因素的水平与试验结果
  • 2.4.4.2 回归方程方差分析和回归系数显著性检验
  • 2.4.5 菜芙蓉中提取黄酮工艺的响应曲面分析与优化
  • 2.4.6 菜芙蓉中黄酮提取的优化与验证
  • 2.5 本章小结
  • 第三章 荧光光度法测定菜芙蓉中的芦丁含量
  • 3.1 引言
  • 3.2 仪器与试剂
  • 3.2.1 仪器
  • 3.2.2 试剂
  • 3.3 实验方法
  • 3.3.1 试剂的配置
  • 3.3.2 荧光强度的测定
  • 3.4 结果与讨论
  • 3.4.1 实验机理探讨
  • 3.4.2 荧光化合物的激发及发射光谱
  • 3.4.3 测定条件的选择
  • 3.4.3.1 温度对荧光强度的影响
  • 3.4.3.2 缓冲盐对荧光强度的影响
  • 3.4.3.3 铁氰化钾对荧光强度的影响
  • 3.4.3.4 硼砂对体系强度的影响
  • 3.4.3.5 静置时间对荧光强度的影响
  • 3.4.4 共存离子的干扰
  • 3.4.5 标准工作曲线
  • 3.4.6 重现性实验
  • 3.5 样品分析
  • 3.5.1 样品溶液的制备
  • 3.5.2 样品测定及精密度试验
  • 3.5.3 加标回收率试验
  • 3.6 本章小结
  • 第四章 荧光光度法测定菜芙蓉中的槲皮素含量
  • 4.1 引言
  • 4.2 仪器与试剂
  • 4.2.1 仪器
  • 4.2.2 试剂
  • 4.3 实验方法
  • 4.3.1 试剂的配置
  • 4.3.2 荧光强度的测定
  • 4.4 结果与讨论
  • 4.4.1 测定波长的选择及机理探讨
  • 4.4.2 测定条件的选择
  • 4.4.2.1 温度对荧光强度的影响
  • 4.4.2.2 Al3+对荧光强度的影响
  • 4.4.2.3 pH 值对荧光强度的影响
  • 4.4.2.4 乙酸钠对荧光强度的影响
  • 4.4.2.5 静置时间对荧光强度的影响
  • 4.4.2.6 紫外光照射时间对荧光强度的影响
  • 4.4.3 共存物质的干扰
  • 4.4.4 标准工作曲线
  • 4.4.5 重现性实验
  • 4.5 样品分析
  • 4.5.1 样品溶液的制备
  • 4.5.2 样品测定及其精密度实验
  • 4.5.3 样品回收率试验
  • 4.6 本章小结
  • 第五章 高效液相色谱法测定菜芙蓉中的黄酮含量
  • 5.1 引言
  • 5.2 仪器与试剂
  • 5.2.1 仪器
  • 5.2.2 试剂
  • 5.3 实验部分
  • 5.3.1 对照品溶液的配制
  • 5.3.1.1 芦丁标准储备液
  • 5.3.1.2 槲皮素标准储备液
  • 5.3.2 样品中黄酮类物质的提取
  • 5.3.3 色谱分离分析条件
  • 5.3.4 计算
  • 5.4 结果与讨论
  • 5.4.1 HPLC 分离条件的确定
  • 5.4.2 测定波长的选择
  • 5.4.3 样品中黄酮类化合物的定性
  • 5.4.4 标准工作曲线
  • 5.4.5 精密度试验
  • 5.4.6 稳定性试验
  • 5.4.7 重复性试验
  • 5.4.8 回收率试验
  • 5.4.9 样品中黄酮的测定
  • 5.5 本章小结
  • 参考文献
  • 致谢
  • 相关论文文献

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