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外源性胆固醇对鹅肝细胞中甘油三酯、总胆固醇含量及相关基因的表达调控研究

2020-12-02阅读(885)

外源性胆固醇对鹅肝细胞中甘油三酯、总胆固醇含量及相关基因的表达调控研究

论文摘要

胆固醇代谢与肝脂肪变性密切相关,目前很少有关于外源性胆固醇对细胞水平的肝内胆固醇及脂肪酸代谢影响及其机制的报道。本实验为了研究胆固醇在肝细胞脂肪变性过程中的作用,以15日龄四川白鹅和朗德鹅原代肝细胞为材料,检测了外源性胆固醇对肝细胞内甘油三酯（TG）,总胆固醇（TC）含量的影响,并采用实时荧光定量PCR检测胆固醇与脂肪酸代谢过程中的关键调控基因FAS、HMGR、SREBP-1/2mRNA表达的变化情况,获得以下主要结果:（1）采用Selgon二步灌流法能够很好的分离纯化鹅肝细胞,平均每只鹅能提取鹅肝细胞6×107细胞,细胞活率达到90%以上。（2） 10～30μg/ml胆固醇均能显著促进两个品种鹅肝细胞中TG合成（P＜0.05）。其中20μg/ml的胆固醇促进作用最为明显;随胆固醇培养时间的增加,细胞中TG含量也逐渐增加,其中48h达到最高,与培养0、12、24h后细胞中TG相比,差异显著（P＜0.05）,与培养72h相比,差异不显著（P＞0.05）;而各处理组中朗德鹅TG含量显著高于四川白鹅（P＜0.05）。（3） 10～30μg/ml显著增加了鹅肝细胞中的SREBP-ImRNA的水平（P＜0.05）,其中20μg/ml的胆固醇促进作用最为明显;同时随着培养时间的延长,SREBP-1的表达量呈现上升趋势,其中48h表达量达到最高,与培养0、12、24h的表达量相比,差异显著（P＜0.05）,与培养72h相比,差异不显著（P＞0.05）;两品种鹅各处理组间比较,朗德鹅SREBP-1mRNA表达量显著高于四川白鹅（P＜0.05）。（4） 10～30μg/ml胆固醇对生脂关键基因FAS的表达有促进作用,显著增加了FASmRNA的表达水平（P＜0.05）,其中20μg/ml的胆固醇促进效果最为显著。随着培养时间的延长,FAS的表达量呈现上升趋势,48h表达量达到最高,与培养0、12、2h的表达量相比,差异显著（P＜0.05）,与培养72h相比,差异不显著（P＞0.05）;两品种鹅各处理组间比较,朗德鹅FASmRNA表达量显著高于四川白鹅（P＜0.05）。（5）不同浓度胆固醇处理后,两品种鹅肝细胞中TC含量变化均不显著（P＞0.05）;随胆固醇处理时间的增加,细胞中TC含量开始呈上升趋势,24h达到最高,与对照组相比,差异显著（P＜0.05）:24h后,TC含量开始下降,72h后,与对照相比,差异不显著（P＞0.05）而两品种鹅各处理组之间相比,朗德鹅肝细胞中TC含量要显著高于四川白鹅（P＜0.05）。（6） 10～30μg/ml胆固醇显著降低了两个品种鹅肝细胞中的SREBP-2 mRNA的水平（P＜0.05）,其中20μg/ml的胆固醇降低效果最为明显;随培养时间的延长,SREBP-2的表达量呈下降趋势,其中培养48h的表达量最低。与培养0、12、24h的表达量相比,差异显著（P＜0.05）,与培养72h相比,差异不显著（P＞0.05）;两品种鹅各处理组间比较,SREBP-2 mRNA表达量间没有显著差异（P＞0.05）。（7） 10～30μg/ml胆固醇显著降低了两鹅肝细胞中的HMGRmRNA的水平（P＜0.05）,其中20μg/ml的胆固醇降低效果最为明显;随培养时间的延长,HMGR的表达量呈下降趋势,其中培养48h的表达量最低。与培养0、12、24h的表达量相比,差异显著（P＜0.05）;与培养72h相比,差异不显著（P＞0.05）;两品种鹅各处理组间HMGR mRNA表达量没有显著差异（P＞0.05）。（8）两品种鹅肝细胞中的TG含量与胆固醇浓度存在一定正相关,但相关不显著（P＞0.05）,而与胆固醇处理时间存在显著正相关（P＜0.05）;SREBP-1mRNA表达量与胆固醇浓度存在一定正相关,但相关不显著（P＞0.05）,而与胆固醇处理时间存在显著正相关;FASmRNA表达量与胆固醇浓度及处理时间均存在显著正相关（P＜0.05）;FASmRNA表达量与SREBP-1mRNA表达量间存在极显著正相关（P＜0.01）。（9）两品种鹅肝细胞中TC含量与胆固醇浓度及处理时间均不存在显著性相关关系:SREBP-2及HMGRmRNA表达量与胆固醇浓度存在一定负相关,但相关不显著（P＞0.05）,而与胆固醇处理时间存在显著负相关:细胞中TC含量与SREBP-2及HMGRmRNA表达量间不存在显著相关关系;HMGRmRNA表达量与SREBP-2mRNA表达量间存在极显著正相关（P＜0.01）。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 1 文献综述
  • 1.1 SREBP-2与胆固醇代谢的调控
  • 1.1.1 SREBP-2的结构特征
  • 1.1.2 SREBP-2与胆固醇合成
  • 1.1.3 SCAP和INSIG在SREBP-2裂解中的作用
  • 1.2 HMGR与胆固醇代谢的调控
  • 1.2.1 HMGR的结构特点
  • 1.2.2 HMGR在胆固醇代谢中的作用
  • 1.2.3 胆固醇对HMGR的反馈调控
  • 1.3 SREBP-1与脂肪酸合成的调控
  • 1.3.1 SREBP-1的结构特点
  • 1.3.2 SREBP-1在脂肪酸合成中的作用
  • 1.3.3 影响SREBP-1作用的因素
  • 1.4 FAS与脂肪酸合成的调控
  • 1.4.1 FAS基因的结构特点
  • 1.4.2 FAS对脂肪酸合成的调控作用
  • 1.5 外源胆固醇对胆固醇与脂肪酸代谢的调控
  • 1.5.1 外源胆固醇对胆固醇代谢的反馈调控
  • 1.5.2 外源胆固醇对脂肪酸代谢的调控
  • 1.6 本试验的目的及意义
  • 2 试验材料与方法
  • 2.1 试验材料
  • 2.1.1 样本采集
  • 2.1.2 主要仪器设备
  • 2.1.3 主要试剂的配制
  • 2.2 试验方法
  • 2.2.1 细胞培养
  • 2.2.2 细胞内TG含量测定
  • 2.2.3 细胞内总胆固醇含量测定
  • 2.2.4 实时荧光定量PCR
  • 2.2.5 试验数据统计方法
  • 3.结果分析
  • 3.1 培养细胞的活性变化
  • 3.2 细胞内TG含量
  • 3.2.1 不同浓度胆固醇处理细胞内TG含量
  • 3.2.2 胆固醇处理不同时间细胞内TG含量
  • 3.3 细胞内TC含量
  • 3.3.1 不同浓度胆固醇处理组细胞内TC含量
  • 3.3.2 胆固醇处理不同时间后细胞内TC含量
  • 3.4 荧光定量PCR反应结果
  • 3.4.1 细胞总RNA提取结果
  • 3.4.2 荧光定量PCR标准曲线
  • 3.4.3 融解曲线
  • 3.5 胆固醇对转录调控因子SREBP-1MRNA表达影响
  • 3.6 胆固醇对生脂基因FAS转录浓度影响
  • 3.7 胆固醇对转录调控因子SREBP-2MRNA表达影响
  • 3.8 胆固醇对HMGR表达影响
  • 3.9 胆固醇与TG含量及相关基因表达间的关系
  • 3.9.1 胆固醇浓度与TG含量及相关基因表达间的相关分析
  • 3.9.2 胆固醇处理时间与TG含量及相关基因表达间相关分析
  • 3.10 胆固醇与TC含量及相关基因表达间的关系
  • 3.10.1 胆固醇浓度与TC含量及胆固醇合成相关基因表达间相关分析
  • 3.10.2 胆固醇处理时间与TC含量及胆固醇合成相关基因表达间相关分析
  • 4 讨论
  • 4.1 肝细胞培养
  • 4.1.1 肝细胞培养作为体外实验模型的缘由
  • 4.1.2 两品种鹅培养方法的异同
  • 4.2 胆固醇在鹅肝细胞中对TG合成的影响及分子机制
  • 4.2.1 胆固醇在鹅肝细胞中对TG合成的影响
  • 4.2.2 胆固醇在鹅肝细胞中对TG合成影响的分子机制
  • 4.3 胆固醇对鹅肝细胞中TC含量的影响及分子机制
  • 4.4 胆固醇对两品种鹅脂质代谢影响差异分析
  • 5 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 附录:硕士研究生学习期间参与科研项目及发表文章

    • 相关论文文献

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