MDV与REV感染肉鸡时的相互作用和MDV重组野毒株的研究

论文摘要

为了研究鸡马立克氏病病毒（MDV）和网状内皮增生病病毒（REV）共感染时的相互作用,分别在REV母源抗体阳性（REV-Ab+）和阴性（REV-Abˉ）及经MDV疫苗CVI988株免疫和不免疫的商品代肉鸡,比较了二种病毒在病毒血症水平和特异抗体效价上的相互影响。结果表明,在经MDV弱毒疫苗CVI988/Rispens株免疫的鸡,如果有REV母源抗体预防REV病毒血症,在接种强毒MDV后, 5周龄时都检不到强毒MDV病毒血症。但在REV-Abˉ鸡,在显示REV病毒血症的同时,也显示强毒MDV的病毒血症。而在未经CVI988/Rispens免疫的鸡,虽然在有REV-Ab+的鸡（133.3±326.6）的REV病毒血症比REV-Abˉ的鸡（1808.3±1413.7）低的多,在MDV病毒血症水平上没有任何区别。但是,却比经MDV弱毒疫苗CVI988/Rispens株免疫但REV-Abˉ的鸡高的多（41.67±33.7）。这表明,REV共感染时MDV病毒血症水平的影响主要是通过降低CVI988/Rispens疫苗的免疫效力发挥作用的。同是在REV-Abˉ鸡,强毒MDV病毒血症水平的高低并不影响攻REV后的病毒血症水平。但是,在都有REV母源抗体的鸡,如果不使用CVI988/Rispens疫苗预防MDV病毒血症,MDV共感染造成的某种免疫抑制,使REV母源抗体阳性的鸡不再能完全有效地抵抗REV感染造成的病毒血症。在用CVI988/Rispense免疫的鸡,其诱发的MDV特异性抗体效价受REV病毒血症的影响很大,特别是在有REV母源抗体的1和7组,在接种REV后均不会有病毒血症,其MDV特异性抗体效价分别是3.8±0.8 （Log10）和4.2±1.0 （Log10）,显著高于没有REV母源抗体而会产生REV病毒血症的2组和8组的1.8±1.0（Log10）和2.3±1.6（Log10）。结果表明,REV感染将显著地抑制CVI988/Rispense免疫诱发的抗体水平。在未经CVI988/Rispense免疫的鸡,分别有REV母源抗体或无REV母源抗体。虽然都在1日龄接种了REV,然而REV病毒血症水平可能差异很大。经测定的3组和4组的结果表明,虽然二组REV病毒血症水平差异很大（133.3±326.6 PFU/ml对1808.3±1413.7 PFU/ml）,但二组间由横

论文目录

• 英文缩略表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1 禽马立克氏病病毒（MDV）综述
• 1.1 马立克氏病病毒分子生物学研究
• 1.2 病原学研究
• 1.3 流行病学
• 1.4 发病机理
• 1.5 临床症状
• 1.6 病理变化
• 1.7 鉴别诊断
• 1.7.1 常规诊断
• 1.7.2 病毒分离与鉴定
• 1.8 防制
• 1.8.1 疫苗的免疫机理
• 1.8.2 常规疫苗
• 1.8.3 基因工程疫苗
• 1.8.4 基因工程缺失苗
• 1.8.5 基因工程重组疫苗
• 2 禽网状内皮组织增殖症病毒（REV）的研究进展
• 2.1 病原学
• 2.1.1 病毒粒子形态及基因组
• 2.1.2 REV 分类
• 2.1.3 活力与稳定性
• 2.2 流行病学
• 2.2.1 宿主
• 2.2.2 传播感染
• 2.3 发病机制
• 2.3.1 细胞的转化及基因调控
• 2.3.2 免疫抑制
• 2.4 临床及病理变化
• 2.4.1 急性网状细胞瘤
• 2.4.2 矮小综合征
• 2.4.3 慢性肿瘤
• 2.5 诊断
• 2.5.1 病毒分离与鉴定
• 2.5.2 分子生物学方法检测
• 2.5.3 鉴别诊断
• 2.6 防制
• 研究内容
• 试验一 鸡马立克氏病病毒和网状内皮组织增殖症病毒共感染肉鸡时病毒血症的相互作用
• 1 材料与方法
• 1.1 病毒
• 1.1.1 R EV
• 1.1.2 MDV
• 1.2 实验用商品代肉鸡
• 1.3 实验鸡的免疫和攻毒
• 1.4 病毒血症的检测
• 1.4.1 间接免疫荧光法（IFA）检测强毒株MDV 蚀斑法对MDV 病毒血症水平的测定
• 1.4.2 间接免疫荧光法（IFA）检测强毒株REV 蚀斑法对REV 病毒血症水平的测定
• 1.5 血清中特异性抗体的检测
• 1.5.1 IFA检测MDV 抗体效价
• 1.5.2 IFA 检测REV 抗体效价
• 1.6 数据的统计分析
• 2 结果
• 2.1 MDV 和REV 在IFA 中显示的病毒蚀斑
• 2.2 REV 母源抗体对REV 病毒血症的影响
• 2.3 REV 与MDV 共感染对病毒血症的相互影响
• 2.3.1 REV 共感染对MDV 病毒血症的影响
• 2.3.2 MDV 共感染对REV 病毒血症的影响
• 2.4 MDV 和REV 共感染对抗体效价的相互影响
• 3 讨论
• 试验二 MDV重组野毒株GX0101的纯化
• 1 材料与方法
• 1.1 鸡胚成纤维细胞（CEF）的制备
• 1.2 MDV 野毒株和REV 单克隆抗体
• 1.3 间接免疫荧光（IFA）检测MDV 野毒株GX0101 中混有的REV
• 1.4 PCR检测GX0101有无游离REV
• 1.4.1 REV前病毒DNA的提取
• 1.4.2 PCR 扩增病毒env 和LTR 基因
• 1.4.3 PCR 产物的电泳
• 1.5 间接免疫荧光检测经去除后GX0101 中有无混有游离REV
• 1.6 PCR 检测经去除后GX0101 中有无混有游离REV
• 2 结果
• 2.1 MDV 野毒株GX0101 中混有的REV 的检测
• 2.2 PCR 检测GX0101 有无游离 REV
• 2.3 用有REV 母源抗体的三黄鸡去除GX0101 中混有的游离REV 后的检测
• 2.4 PCR 扩增env 和LTR 基因检测经三黄鸡去除后GX0101 中有无混有游离REV
• 3. 讨论
• 试验三 MDV 野毒GX0101 克隆株基因组中REV LTR 基因克隆及序列分析
• 1 材料与方法
• 1.1 鸡胚成纤维细胞（CEF）的制备
• 1.2 GX0101 毒株的扩增及冻存
• 1.3 GX0101 毒株的克隆化
• 1.4 分子生物学试剂
• 1.5 病毒的增殖和细胞DNA 的提取
• 1.6 MDV 和REV 间整合位点相关序列的扩增
• 1.6.1 MDV 和REV 间整合位点相关序列的扩增的引物
• 1.6.2 MDV 和REV 间整合位点相关序列的扩增程序
• 1.6.3 PCR 产物的电泳
• 1.6.4 PCR 产物的回收和定量
• 1.6.5 DNA的连接反应
• 1.6.6 TG1大肠杆菌感受态细胞的制备
• 1.6.7 连接产物的转化
• 1.6.8 质粒DNA 的提取
• 1.6.9 重组质粒DNA 的酶切鉴定
• 1.6.10 PCR 产物的测序及序列分析
• 2 结果
• 2.1 三黄鸡体中GX0101 的分离
• 2.2 GX0101 克隆株的获得
• 2.3 整合进GX0101 基因组中的REV 片段的扩增结果
• 2.3.1 整合进GX0101 基因组中的REV 片段的扩增引物
• 2.3.2 整合进GX0101 基因组中的REV 片段的扩增结果
• 2.4 整合进GX0101 基因组中的REV 片段的克隆测序和序列分析
• 3. 讨论
• 研究的主要结论
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的主要论文
• 个人简介
• 致谢